【摘 要】
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磷对大豆生长发育至关重要,土壤有效磷缺乏严重影响大豆产量品质。发掘利用磷高效基因并选育转基因新品种是解决上述问题最经济有效途径。本研究在课题组前期已克隆转录因子Gm
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磷对大豆生长发育至关重要,土壤有效磷缺乏严重影响大豆产量品质。发掘利用磷高效基因并选育转基因新品种是解决上述问题最经济有效途径。本研究在课题组前期已克隆转录因子GmPHR1,并证实其在转基因拟南芥中具有提高磷素利用效率基础上,利用获得的转GmPHR1大豆新种质,研究其在转基因大豆中的生物学功能;同时通过农杆菌介导及常规杂交技术实现GmPHR1与其它磷高效基因共转化,并探索转基因大豆选择标记去除技术。主要结果如下: 1.通过PCR扩增、DNA测序及Southern blot发现目的基因在转基因大豆株系中稳定整合,通过实时定量PCR和Western blot分析获得了GmPHR1高效表达转基因株系。 2.低磷胁迫处理下,分析不同大豆转基因株系磷素利用效率及产量相关性状发现,2个ZH41-PHR1株系与4个JD12-PHR1株系叶片磷含量、MDA与H2O2含量、花青素含量与净光合速率等磷素利用效率相关性状显著优于野生型对照,且低磷条件下的单株荚数、单株粒数和粒重等产量性状也较野生型对照显著增加。 3.通过农杆菌介导转化技术实现了GmPHR1与GmPAP4双基因共转化,获得了转双基因大豆新种质JD12-PAP4-PHR1;同时利用常规杂交技术也实现了GmPHR1与GmPAP4双基因共转化,获得了转有GmPHR1与GmPAP4双基因新种质JD12-AP4-PHR1。 4.探明了利用β-雌二醇化学诱导法删除转基因大豆LoxP位点间选择标记基因的可行性,利用Cre过表达法删除选择标记基因,目前已获得转Cre大豆新种质JD17-Cre,为采用常规杂交技术去除选择标记研究奠定了基础。 基于以上研究结果,得出本研究结论:证实了转GmPHR1大豆株系目的基因稳定整合并高效表达,GmPHR1具有提高转基因大豆磷素利用效率的功能;实现了转录因子GmPHR1与紫色酸性磷酸酶GmPAP4共转化,获得了转双基因大豆新种质。
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