目的:手足口病（Hand foot and mouth disease,HFMD）是由多种肠道病毒（Enterovirus,EV）引起的急性传染病,其发病机理尚不清楚。天然免疫系统是儿童防御病毒感染的主导力量,其中的自然杀伤细胞（Natural killer cells,NK）在抗病毒感染的免疫应答中起着非常重要的作用。目前有关NK细胞在HFMD中的作用尚不明确。因此,本课题将研究NK细胞的两个重要亚群CD56^bright和CD56^dimim NK细胞在HFMD患儿外周血中的频率,表型及功能活性的变化,探讨其在不同病情及EV71感染中的作用。方法:1.严格遵照纳入排除标准随机纳入55例急性期HFMD患儿和39例同期于门诊体检的健康儿童（Healthy Children,HC）。2.应用流式细胞术检测受试儿童外周血CD56^bright和CD56^dimim NK细胞的频率、表面受体（NKp46,NKG2D,NKG2A）及杀伤功能相关分子或细胞因子分泌功能（CD107a,GB,GL或TNF-α,IFN-γ,IL-10）。3.酶联免疫吸附法检测血浆中细胞因子和趋化因子（IL-2,IL-6,IL-10,TNF-α,IFN-γ和MCP-1）的浓度水平。4.实验数据用平均数±标准误（?X±SEM）表示,SPSS v.23.0（SPSS Inc,USA）软件用于统计分析。根据正态假设的有效性和方差的同质性,使用单因素方差分析ANOVA或Kruskal Wallis检验等方法检测多组连续变量平均值的差异。使用Spearman相关系数评估两组统计变量间的相关性。当p<0.05则认为差异具有统计学意义。结果:1.与HC相比,轻症HFMD患儿的CD56^dimim NK细胞表达NKp46受体水平显著下降（P<0.01）,而表达CD107a,GB和GL的水平显著增加（P<0.05）;CD56^brightright NK细胞表达NKG2A受体水平和IFN-γ显著减少（P<0.01）而GB、GL和IL-10的表达明显增高（P<0.05）。与HC相比,重症HFMD患儿的总NK或CD56^dimim NK细胞的数目和频率显著减少（P<0.01）;CD56^dimim NK细胞表达NKG2D受体水平降低（P<0.01）而NKG2A受体水平增加（P<0.05）;CD56^brightright NK细胞表达NKG2D、NKG2A受体和IFN-γ水平减少（P<0.05）,而TNF-α明显增高（P<0.001）。与轻症患儿相比,重症患儿CD56^dimim NK细胞中CD107a,GB和GL的表达呈减少趋势,其中以GL减少显著（P<0.01）。2.与HC比,EV71⁺HFMD患儿总NK细胞或CD56^dimim NK细胞数目和频率显著减少（P<0.05）,CD56^dimim NK细胞表达NKG2A显著升高（P<0.05）,CD56^brightright NK细胞表达IL-10和TNF-α（P<0.01）均显着增加。与HC相比,EV71^-HFMD患儿中CD56^dimim NK细胞表达NKp46和NKG2D受体水平均明显下降（P<0.05）而表达NKG2A受体和GB分子均增加（P<0.05）,CD56^brightNK细胞表达NKG2D,NKG2A受体和IFN-γ分子均减少（P<0.05）而TNF-α分子增高（P<0.05）。与EV71⁺HFMD比,EV71^-HFMD患儿中CD56^brightright NK细胞表达IFN-γ比例显著减少（P<0.05）。与HC比,重症EV71⁺HFMD患儿CD56^dimNK细胞表达GB呈增加（P<0.05）而GL呈减少的趋势,CD56^brightright NK细胞表达TNF-α和IL-10明显升高（P<0.05）;重症EV71^-HFMD患儿CD56^brightright NK细胞表达IFN-γ比例显著减少（P<0.01）而TNF-α明显增高（P<0.01）。3.与HC相比,轻症患儿血浆中除了TNF-α水平增高（P<0.001）外,其他的炎性因子均无显著变化;重症HFMD患儿IL-6、IFN-γ、TNF-α和MCP-1的血浆浓度明显增高（P<0.05）。且与轻症患儿比,重症患儿IL-10血浆水平明显增高（P<0.05）。与HC相比,EV71⁺HFMD患儿血浆IFN-γ、TNF-α、IL-6水平均升高（P<0.05）;EV71^-HFMD患儿血浆IFN-γ、TNF-α、IL-10和MCP-1水平均升高（P<0.01）。与EV71⁺HFMD患儿比,EV71^-HFMD患儿血浆中的IL-10水平显著增高（P<0.05）。各组间IL-2血浆浓度水平均无统计学差异（P>0.05）。4.患儿PCT水平与GB⁺CD56^dimim NK百分比呈负相关（P<0.05）,而与IFN-γ血浆浓度水平呈正相关（P<0.01）;LYM%与NKG2D⁺和GB⁺CD56^dimim NK细胞百分比呈正相关（P<0.05）,而与血浆IL-10浓度呈负相关（P<0.01）;MCP-1的血浆浓度与IL-10⁺CD56^dimim NK的百分比呈正相关（P<0.05）;IL-2的血浆浓度和CD56^brightright NK细胞数呈正相关（P<0.05）。结论:1.外周血NK细胞在重症和EV71感染患儿显著减少,主要表现为CD56^dimim NK细胞的锐减,而CD56^brightright NK细胞无明显变化。2.外周血CD56^dimim NK细胞在HFMD病情较轻时细胞毒性功能（CD107a,GL和GB）增加可能与病毒清除相关;随着病情的加剧,其表达抑制性受体（NKG2A）升高而杀伤性分子降低,表现为细胞耗竭或功能障碍状态,从而可能与HFMD重症化有关。3.CD56^brightright NK细胞在EV71感染患儿中炎性细胞因子与抗炎因子分泌均增加,分泌功能严重紊乱,可能参与了EV71感染的HFMD重症化。4.HFMD中NK细胞及其亚群数目、表型和免疫功能变化与HFMD疾病的发生发展密切相关。