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[目的]观察CPG ODN2006对人脐血来源DC增殖、分化和成熟的影响,探讨其体外应用对细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes, CTL)抗肿瘤效应的作用及探讨CpG ODN2006对树突状细胞(DC)疫苗抗肿瘤作用的影响。[方法] 1应用CpG ODN2006作为DC的成熟刺激信号,体外控制DC充分成熟。①联合应用GM-CSF和IL-4,CpG ODN2006从人脐带血中经梯度离心法获得DC。②流式细胞术检测CpG ODN2006以不同浓度、不同时间刺激DC表达CD1a、CD86、HLA-DR、MHC-I的表达情况。③RT-PCR半定量检测CpG ODN2006刺激后DC分泌IL- 12 (p35、P40)水平变化。④MTT法检测CpG ODN2006活化DC刺激T细胞增殖的能力。2以肿瘤细胞冻融和融合的方式将肿瘤抗原负载于DC,以PKH26—一种荧光染料作为融合细胞的筛选标志,进而制备出树突状细胞疫苗。以特异性杀伤细胞活性和淋巴细胞增殖反应测定疫苗的体外免疫活性。①经过反复冻融肿瘤抗原(tumor antigen, TAg)致敏CpG ODN刺激组及未刺激组DC;肿瘤细胞与CpG ODN2006刺激组及未刺激组DC细胞进行融合,并进行分选及鉴定。同时体外诱导获得CTL, MTT法检测CTL对卵巢癌细胞株HO8910的特异性杀伤效应。②同时采用流式细胞仪的方法检测上述不同条件作用及不同肿瘤抗原负载形式下CD1a、CD86、HLA-DR、MHC-I的表达情况。3制作裸鼠的卵巢癌模型,将上述各组疫苗经小鼠皮下注射,观察CpG ODN2006刺激各组及未刺激各组治疗和预防实验肿瘤的生长情况。[结果]①经CpG ODN2006刺激后的DC细胞形态呈成熟状态,流式细胞仪分析检测刺激前后DC细胞表面分子CD1a,CD86,HLA,MHC-I的表达较未刺激组明显升高,有显著性差异。②刺激后的DC表面IL-12的分泌水平与未刺激组相比有显著性差异。③刺激后DC融合疫苗CTL活性、T淋巴细胞增殖活性及体内卵巢癌移植瘤的抑瘤率均明显高于未刺激的DC组(P<0.05)。[结论] CpG ODN2006能通过诱导DC成熟,增强DC疫苗的抗肿瘤作用,有效诱导机体产生特异的抗肿瘤反应。未成熟的DC可以通过与肿瘤抗原冻融或融合的方式,获得较好的抗原捕获效果,产生一定的抗肿瘤效应。而对于刺激成熟的DC则需通过融合手段负载抗原,达到有效的抗肿瘤活性。