肺癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一,也是目前全世界发病率和死亡率最高的癌症。肺癌的发生、增殖、侵袭是多因素参与、多步骤完成的,虽然从基因水平和转录水平已对肺癌进行了许多成功的研究,但其癌变机制仍不十分明确,也缺乏有效的用于肺癌预警和预后监测的特异分子标志物。因而能够高效率、高通量地筛查组织中与肺癌发生、发展相关蛋白并制备其抗体,在肺癌肿瘤的预警、筛检、预后、治疗中显得极为重要。 本课题应用蛋白质组学技术对肺癌组织与配对的癌旁组织的蛋白质组进行筛选和识别,根据蛋白质表达差异筛选肺癌相关蛋白;运用蛋白质纯化技术从肺癌组织中获得HSP70纯品,并从噬菌体表面展示技术构建的人源性肺癌单链抗体库中初步筛选到融合抗体。对我国高发肿瘤的防治实践有重要的应用价值,对阐明肺癌发生的分子机制和预后研究以及靶向治疗有重要理论意义。 研究方法: 1 蛋白质组学方法筛选鉴定肺癌相关蛋白 1.1 收集16例手术切除的新鲜肺癌组织及同一患者手术的癌旁组织,标本均于液氮中保存备用。用双向电泳蛋白裂解液提取可溶性总蛋白,并用Bradford方法测定蛋白浓度。用于分析型和制备型凝胶上样量的依据。 1.2 应用等电聚焦(IEF)电泳和十二烷基磺酸钠聚丙烯酰凝胶电泳(SDS-PAGE)技术将16例配对的肺癌组织和癌旁组织可溶性总蛋白分离,得到肺癌的蛋白质