自发性高血压大鼠平滑肌细胞线粒体功能的研究

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背景:原发性高血压(Essential hypertension, EH)是人类最为常见的心血管疾病之一,也是心力衰竭、冠心病和脑卒中等疾病的重要危险因素,严重影响人类健康及寿命。目前多个研究表明线粒体基因(mtDNA)突变与高血压发病存在相关性,即母系遗传。相关研究指出,mtDNA突变可能是通过改变线粒体能量的合成、活性氧(reactive oxygen specie, ROS)的产生及钙稳态等线粒体功能来影响血压的。那么线粒体功能与EH间存在怎样的关系,在高血压中是否发生了线粒体功能的改变,发生了怎样的改变,这将为人类在线粒体基础上研究高血压发病机制提供有力的理论依据。目的:研究自发性高血压大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMCs)线粒体功能的变化。方法:(1)取19—20周的雄性自发性高血压大鼠(SHR)及相应年龄段的雄性正常大鼠(WKY),利用贴壁法培养出VSMCs,取第3代稳定的细胞作为研究对象;(2)镜下观察、比较高血压组与正常组细胞的形态改变,利用荧光法检测细胞内ATP水平,并利用流式细胞仪检测两组细胞的ROS及线粒体膜电位水平;(3)取106的细胞,分别提取RNA,real-time PCR法检测线粒体呼吸链上的ND1、ND2、Cytb8、ATP8及CO1的mRNA表达情况。结果:1.在相同条件下,光学显微镜下观察正常大鼠培养出来的VSMCs较高血压平滑肌细胞状态好。2.经免疫细胞化学鉴定,所培养出的细胞为平滑肌细胞,具有较好的纯度。3.在反应细胞功能的ATP量中,高血压大鼠组的ATP产生量为51.581±3.280nmol/L,较正常对照组的60.873±2.750nmol/L明显减少(n=6,P<0.01);而高血压组平滑肌细胞中ROS为1.082±0.146,较正常组平滑肌细胞ROS为0.752±0.043升高明显(n=6,P<0.01);线粒体膜电位的检测,高血压平滑肌的线粒体膜电位为1.401±0.132,较正常组平滑肌线粒体膜电势1.614±0.173降低显著(n=6,P<0.01)。4. ND1的mRNA表达量在高血压组(0.488±0.055)明显低于正常组(1.000,P<0.01);而ND2的mRNA表达量高血压组(0.907±0.253)与正常组(1.000)无明显差异;呼吸链复合体III上Cytb的mRNA表达在高血压组(0.955±0.232)与正常对照组(1.000)无明显差异;呼吸链复合体IV中的CO1mRNA表达在高血压组有所增加(1.247±0.289),而复合体V的ATP8的mRNA表达在高血压组(1.167±0.283)也略高于正常组,但二者均无统计学意义的差异。结论:1.线粒体的功能状态受到高血压影响明显,尤其是在反应线粒体功能的一些指标(如细胞状态、ATP水平、ROS、线粒体膜电位水平等)。2. ND1突变可能与高血压的发生发展存在一定的相关性。
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