【摘 要】
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目的开发制备GCET2兔单克隆抗体,研究其在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma, DLBCL)诊断中的应用。方法用人GCET2蛋白片段免疫兔子,取血清效价最高兔子的脾
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目的开发制备GCET2兔单克隆抗体,研究其在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma, DLBCL)诊断中的应用。方法用人GCET2蛋白片段免疫兔子,取血清效价最高兔子的脾细胞与兔骨髓瘤细胞240E-W3融合,采用兔单克隆抗体技术制备GCET2兔单克隆抗体；经免疫印迹(WB)、免疫组化(IHC)和免疫细胞化学(ICC),流式细胞术等方法鉴定其特异性；采用IHC法,检测GCET2与其他DLBCL诊断相关标记(CD10、Bc16、MUM1、GCET1、FOXP1、Ki67和c-myc)在81例DLBCL、5例滤泡细胞淋巴瘤(follicular lymphoma, FL)和2例Burkitt’s淋巴瘤临床样本组织中的表达,并将GCET2增补进Hans分类法和Choi分类法,比较在生发中心来源的DLBCL(Germinal center B-cell like DLBCL, GCB-DLBCL)诊断中的差异。结果经ELISA、WB、IHC、ICC及流式细胞术鉴定,GCET2(EP316)抗体能特异性识别生发中心B细胞及其来源的肿瘤组织和细胞系(Raji,Daudi和Ramos)中的GCET2蛋白；以Hans分类法和Choi分类法对81例DLBCL进行分类,GCB-DLBCL所占比例分别为21%(17/81)和23%(19/81),增补GCET2后GCB-DLBCL诊断比例分别提高至54%(44/81)和52%(42/81)。此外,c-myc高表达DLBCL样本在GCET2阴性表达和阳性表达样本中所占比例分别为15.2%(7/46)和2.8%(1/35)。结论本研究制备的GCET2 (EP316)抗体具有良好的特异性,是一种敏感的生发中心B细胞标记抗体。GCET2与Hans分类法和Choi分类法联用,在DLBCL诊断上具有一定的临床应用价值。
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