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拟禾本科根结线虫(Meloidogyne graminicola)广泛分布于缅甸、孟加拉国、老挝、泰国、越南、印度、中国、菲律宾和美国等国,是水稻根结线虫病最主要的病原之一,被认为是影响水稻产量最严重的植物寄生线虫。近年来,我国主要水稻种植区水稻根结线虫病的发生面积逐年扩大,日趋成为制约水稻品质和产量的主要根部病害。然而,相比于模式线虫秀丽杆线虫(Caenorhabditis elegans)、其它植物寄生线虫如南方根结线虫(M incognita)和北方根结线虫(M hapla),M graminicola功能基因组的研究进展相当缓慢,关于其功能基因的分子生物学基础的报道更是罕见。本研究以M graminicola为对象,对田间采集的水稻根结线虫进行了鉴定,克隆出M graminicola的4个flp基因,并采用原位杂交定位及RNAi技术对其中Mg-flp-14、Mg-flp-18基因进行了功能分析。运用传统的形态学鉴定方法对采自海南水稻田的2个根结线虫种群1MSY和10MDZ的重要形态特征进行了测量及会阴花纹切片观察,测量和观察结果与M.graminicola的特征吻合;运用分子生物学技术对线虫样本28S rDNA-D2/D3区序列进行验证。同源性分析表明,根结线虫种群1MSY和10MDZ与相同种或属内相近种的同源性较高,而与不同属的不同种之间的同源性相对要低。结合形态学鉴定、分子生物学鉴定及同源性分析结果,将两地采集的水稻根结线虫病病原线虫1MSY和10MDZ鉴定为拟禾本科根结线虫(M graminicola)。通过 RT-PCR 克隆了 M graminicola 的 4 个flp基因 Mg-flp-1(GenBank 登录号MK886770)、Mg-flp-13(GenBank 登录号 MK886771)、Mg-flp-14、Mg-flp-18的片段,其片段大小分别为493 bp、269 bp、673 bp、721 bp。运用RACE技术扩增了Mg-flp-14基因1,047 bp全长(GenBank登录号MK855119)及Mg-flp-18基因3端序列931 bp(GenB ank登录号MK886769)。Mg-flp-14基因含有315 bp的ORF开放阅读框,编码104个氨基酸,5’非翻译区644 bp,3’非翻译区88 bp,3’端含有一个低聚腺苷酸加尾信号(aataaa);Mg-flp-18基因片段的3’端完整且有一个408 bp ORF开放阅读框,编码135个氨基酸,3’非翻译区352 bp,3’端含有一个低聚腺苷酸加尾信号(aataaa)。对Mg-flp-14和Mg-flp-18基因编码蛋白的结构进行了分析。采用原位杂交技术对M graminicola的Mg-flp-14、Mg-flp-18两个基因进行了定位分析。结果显示Mg-flp-14基因在线虫口针、环咽神经环及排泄孔周围的神经环部位均显著表达,在线虫体中部有部分弥散;Mg-flp-18基因在线虫排泄孔周围的神经环处显著表达,在线虫体中部也有部分弥散。采用RNAi技术检测了Mg-flp-14和Mg-flp-18基因的沉默效果。体外浸泡M.graminicola J2的间苯二酚浓度及浸泡时间筛选结果表明,0.3%间苯二酚刺激6 h以上,更有利于M graminicola J2的体外吞噬;以gfp dsRNA为对照,Mg-flp-14dsRNA和Mg-flp-18 dsRNA分别处理线虫后,采用半定量技术检测M graminicola J2体内Mg-flp-14和Mg-flp-18基因的沉默效果发现,Mg-flp-14 dsRNA无沉默效果,Mg-flp-18 dsRNA的沉默效果较低。