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研究目的:通过慢病毒转染介导胰腺癌细胞系SEMA3B表达上调,研究SEMA3B过表达对人胰腺癌CFPAC-1和PANC-1细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响,进一步探讨SEMA3B基因在胰腺癌组织中的表达水平与胰腺癌临床病理特征的关系。实验方法:体外培养人胰腺癌CFPAC-1和PANC-1细胞,运用慢病毒载体将重组SEMA3B转染到两株胰腺癌细胞中,提取转染组和对照组细胞中mRNA及蛋白,运用qRT?PCR和Western Blotting检测SEMA3B mRNA和蛋白在胰腺癌细胞中的表达水平,检测SEMA3B转染效率。运用CCK-8试剂研究过表达SEMA3B基因对胰腺癌CFPAC-1和PANC-1细胞增殖能力的影响;Transwell实验研究过表达SEMA3B基因对胰腺癌CFPAC-1和PANC-1细胞侵袭能力的影响;细胞划痕实验研究过表达SEMA3B基因胰腺癌CFPAC-1和PANC-1细胞迁移能力的变化。收集来自2009年1月-2016年6月兰州大学第一医院普外二科、普外五科、特需外科及东岗院区普外科31例胰腺癌组织切片及相关临床病理资料,所有标本经过病理医师确定为胰腺癌,且在外科手术之前未接受放化疗。采用免疫组织化学方法检测31例胰腺癌组织中SEMA3B的表达水平,探讨SEMA3B表达水平与胰腺癌临床病理特征的关系。实验结果:转染后运用qRT-PCR和Western Blotting检测SEMA3B在胰腺癌细胞中的转染率,结果显示两株细胞中SEMA3B mRNA和蛋白表达量较对照组显著上调(P<0.001)。CCK-8增殖实验结果显示,与对照组细胞相比过表达SEMA3B组细胞增殖活性显著受到抑制(P<0.001)。Transwell实验结果示,过表达SEMA3B组的两株细胞的穿膜细胞数均比对照组明显减少(P<0.001)。细胞划痕实验结果显示,过表达SEMA3B组的两株细胞划痕相对面积在24和48小时均较对照组显著增大(P<0.01)。31例胰腺癌患者组织免疫组化结果显示,25例胰腺癌标本中SEMA3B低表达,6例胰腺癌标本中SEMA3B高表达,χ2检验或Fisher精确概率法分析显示,胰腺癌组织中SEMA3B表达水平与淋巴结转移(P<0.05)、远处转移(P<0.05)、肿瘤分期(P<0.05)及局部组织侵袭(P<0.05)呈负相关。结论:重组SEMA3B的慢病毒载体可成功转染胰腺癌CFPAC-1和PANC-1细胞并构建稳定表达SEMA3B的细胞模型,过表达SEMA3B可明显抑制胰腺癌CFPAC-1和PANC-1细胞的增殖、侵袭及迁移能力。临床胰腺癌组织中SEMA3B表达水平与肿瘤分期、局部侵润、淋巴转移及远处转移呈负相关,SEMA3B表达水平越低,胰腺癌病理恶性程度越高。