目的：结直肠癌是当前最常见的消化道恶性肿瘤之一，在欧美国家肿瘤患者的死亡原因中列第三位，在我国也逐渐呈高发趋势，但目前治疗手段单一，手术、放化疗都不能取得理想的效果，迫切需要寻找新的解决途径。近年来，随着光动力疗法(PDT)相关技术的快速发展，PDT以其独特的优点在肿瘤治疗中显示出很强的生命力。第二代光敏剂ALA是一种内源性光敏剂，具有更高的选择性聚集能力，吸收波长更长，具有更深的穿透能力，产生更大范围内的杀伤，同时它的光毒性极小，因而副作用小，可以口服，从而为ALA-PDT在临床治疗胃肠道肿瘤提供了条件。我们应用ALA-PDT对结肠癌进行了体内和体外实验研究，探讨ALA-PDT作为一种新型疗法治疗结肠癌的可行性；同时，PDT抑制杀伤肿瘤细胞的作用机制目前仍不完全清楚，已有研究表明PDT可通过阻滞细胞周期来介导细胞凋亡作用，G1/S期关卡是影响细胞周期的关键限制点，也是改进肿瘤治疗效果的理想干预点,而G1/S关卡相关调控因子影响着这一进程，本研究的目的在于了解PDT阻滞肿瘤细胞周期与G1/S关卡调控因子之间的联系。方法：1、对体外培养的SW480结肠癌细胞进行ALA－PDT实验，观察ALA－PDT对结肠癌细胞在体外的杀伤抑制作用和形态学变化；2、建立SW480结肠癌裸鼠荷瘤模型，观察ALA-PDT对结肠肿瘤的杀伤抑制作用及组织形态学影响；3、使用流式细胞仪技术观测ALA－PDT对SW480细胞的细胞周期阻滞作用；4、应用免疫组化和原位杂交技术检测ALA－PDT对G1/S关卡调控因子Chk2、cyclinD1 、p21 WAF1/Cip1/Sdi1蛋白和mRNA表达的影响。结果：1、ALA-PDT(ALA 1mM，9J/cm2)可于治疗后24小时内明显抑制体外培养的人结肠腺癌SW480细胞，但在24小时后， SW480细胞总数和存活率开始缓慢上升，而空白对照组、单纯使用光敏剂(ALA 1mM)及单纯激光照射组(9J/cm2)对细胞增殖均无明显影响 ；2、ALA-PDT(ALA 250mg/kg，9J/cm2)可对裸鼠结肠肿瘤在PDT治疗后早期产生明显的抑制增殖作用，体积抑瘤率达64.1%，而于治疗后期，肿瘤体积仍会缓慢增长，但增长速度明显小于对照组，单纯使用光敏剂(ALA 250mg/kg)及单纯激光照射组(9J/cm2)对肿瘤生长增殖没有明显影响；ALA-PDT治疗后早期(7d)可引起瘤体组织坏<WP=7>死，腺腔样结构解离破坏，而在治疗后期(21d)可观察到坏死灶与肿瘤细胞团并存；3、与对照组相比，ALA-PDT可明显延长荷瘤裸鼠的生存期，达34.0±6.0d，延命率40.2%；4、ALA-PDT可在PDT作用后早期(6h)诱导细胞产生G0-G1细胞周期阻滞, G0/G1期比例显著增加，而S期和G2/M期比例明显下降，且呈时间依赖性变化；5、PDT可于作用后早期(6h)诱导G1/S关卡调控因子Chk2、p21WAF1/Cip1/Sdi1蛋白表达增高，降低cyclinD1 mRNA和蛋白的表达，与G1/S期阻滞进程相一致，均呈时间依赖性变化。结论：1、应用ALA-PDT治疗后可明显抑制体外培养的人结肠腺癌SW480细胞及裸鼠种植瘤的生长，延长荷瘤裸鼠的生存期；虽然随着时间延长，肿瘤体积仍会缓慢增长，但增长速度明显小于对照组。2、ALA-PDT的抑癌作用机理可能与其参与细胞周期G1/S期调控有一定关系，具体表现在：(1)ALA-PDT可诱导SW480细胞产生G0-G1细胞周期阻滞；(2)ALA-PDT可诱导G1/S关卡负向调控因子Chk2、p21 WAF1/Cip1/Sdi1的表达，降低正向调控因子cyclinD1的表达，这与G1/S期阻滞进程相一致，均呈时间依赖性变化，这一现象提示ALA-PDT的G0-G1细胞周期阻滞作用与G1/S关卡调控事件有关。(3) ALA－PDT可在p53突变的情况下诱导SW480细胞p21 WAF1/Cip1/ Sdi1的表达，阻滞肿瘤细胞于G0-G1期，ALA-PDT对SW480细胞的G1/S期阻滞作用可能是通过p53非依赖性的G1/S关卡通路进行的