鹿茸多糖的提取工艺及质量标准研究

来源 :辽宁中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liak19870702
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目的:1筛选和优化超声提取鹿茸多糖的最佳工艺。2确定梅花鹿茸和马鹿茸药材和提取物中多糖的含量;并对鹿茸提取物进行定性鉴别及水分检查。3对比梅花鹿茸和马鹿茸多糖单糖组成的差别以及含量的差异。材料与方法:1.本实验采取水提醇沉的原理,以水作为提取溶剂进行超声提取,采用苯酚-硫酸法测定的马鹿茸多糖含量,并以此作为评价指标进行L9(34)正交设计试验,同时研究粒度、提取次数、液料比、提取时间对提取过程的影响;比较鹿茸药材是否脱脂对鹿茸多糖含量是否有影响,比较提取次数对于超声提取鹿茸多糖的影响,以此优选出超声提取的最佳提取次数,完善鹿茸多糖提取工艺。2.梅花鹿、马鹿茸经过刮毛、切块粉碎后,先用30-60沸程的石油醚脱脂,再通过水提醇沉的原理分别提取超声和水煎煮的鹿茸粗多糖,然后用Sevage法去除蛋白质,过氧化氢脱色,并使用Molish试验(α-萘酚试验)、葸酮-硫酸试验、Fehling试验与紫外光谱分析、淀粉的碘试验对其进行定性鉴定;采用苯酚-硫酸法,D-葡萄糖为对照,测定梅花鹿和马鹿茸药材及提取物中多糖的含量并对其提取物进行水分检查及定性鉴别。3.梅花鹿、马鹿茸经过刮毛、切块粉碎后,先用30-60沸程的石油醚脱脂,再通过水提醇沉的原理分别提取超声和水煎煮的鹿茸粗多糖,然后用Sevage法去除蛋白质,过氧化氢脱色,再采用三氟乙酸水解、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮试剂柱前衍生化处理,最后采用高效液相色谱法进行分析,对比梅花鹿茸和马鹿茸多糖单糖组成的差别以及含量的差异。结果:1.本实验的最佳提取工艺为药材粒度80100目,提取3次,液料比18:1,提取时间40分钟;脱脂后鹿茸多糖含量高于不脱脂;超声提取以3次为佳。2.经过鉴别可知,所提取的灰白色物质为多糖,其多糖含量在18.34-31.74 mg.g-1范围内,并且鹿茸经过精制后,提取物中多糖含量明显高于药材中多糖含量,且鹿茸药材与其提取物中梅花鹿茸多糖含量均高于马鹿茸。通过方法学考察,本方法建立的标准曲线在该范围内具有良好的线性关系,且精密度、稳定性、重复性和样品回收率均符合要求,建立了紫外分光光度法进行鹿茸多糖的含量测定,可以考虑应用到鹿茸多糖的质量控制。3.梅花鹿茸和马鹿茸多糖经高效液相色谱分析得出其单糖组成种类相同,均是由8种单糖组成,但组成比例存在差异,并且马鹿茸多糖的含量和得率要低于梅花鹿茸。通过方法学考察,本方法建立的标准曲线在该范围内具有良好的线性关系,且精密度、稳定性、重复性和样品回收率均符合要求,可以考虑应用此方法研究鹿茸多糖中单糖的组成。结论:1、鹿茸多糖超声提取工艺稳定、可靠、简便、易行,适用于鹿茸多糖的提取。2、建立的苯酚-硫酸法具有简便、稳定、准确的特点,适用于鹿茸多糖的含量测定及质量控制。3、建立的柱前衍生化高效液相色谱法具有简便、准确、重复性好的特点,适用于鹿茸多糖中单糖组成的研究及含量测定。
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