抗生素的发现和广泛应用不仅挽救了无数人的生命,在畜禽养殖的细菌性疾病防控中也发挥了重要的作用。然而,随着抗生素的广泛使用甚至是滥用,细菌对抗生素耐药性的比例不断提高,严重削弱了现有抗生素的临床疗效。在过去的二十年中,很少有具有新骨架或靶标的抗菌药物获得批准使用,这进一步加剧了细菌耐药性危机。值得关注的是,将已批准使用的药物作为抗菌增效剂使用,不仅可以减轻耐药性的发展,还可解决由多重耐药细菌导致的感染问题,给临床治疗提供了一种更加经济有效的方案。通过抑制前列腺素合成而发挥抗炎、镇痛作用的非甾体类抗炎药盐酸苄达明被报道可预防口腔黏膜炎和术后咽喉痛,最新的研究还表明盐酸苄达明可抑制破骨细胞形成和骨吸收。然而,其作为抗菌增效剂的潜力还尚不清楚。因此,本文探究了盐酸苄达明是否能作为抗菌增效剂使用以恢复耐药菌对抗生素的敏感性,并延缓抗生素耐药性的发展。首先,为探究盐酸苄达明和抗生素的药物间相互作用,本研究以八种抗生素与一株多重耐药菌E.coli B2为研究对象进行棋盘微量肉汤稀释试验,以期测定抗生素和盐酸苄达明联合用药的分级抑菌浓度指数（FICI）。结果发现,盐酸苄达明与卡那霉素等联合使用表现出拮抗作用,与环丙沙星、多黏菌素和四环素类抗生素（多西环素、替加环素、四环素、土霉素、米诺环素）表现出协同作用,其中对四环素类抗生素协同作用最显著（FICI=0.188）。接下来继续测定了盐酸苄达明与四环素类抗生素联合用药对不同耐药病原菌的活性,以确定协同作用的抗菌谱。研究显示,联合用药对敏感菌和耐药菌均具有协同作用,可显著提高多西环素对多种临床重要病原菌的抗菌活性,包括MRSA,CRE,MCRPE 和 tet（X）阳性病原菌。随后,研究选择两株革兰阳性菌（S.aureus ATCC29213和MRSAT144）和两株革兰阴性菌（E.coli ATCC25922和E.coli B2）为代表菌株,通过测定质子驱动力、胞内抗生素累积量、时间杀菌曲线和转录组学分析等进一步探究了盐酸苄达明对四环素类的增效作用机制。结果表明,盐酸苄达明对多西环素的协同活性与质子驱动力（PMF）密切相关。盐酸苄达明可消散病原菌的膜电位（ΔΨ）,进而上调跨膜质子梯度（ΔpH）并促进四环素类药物的进入。此外,盐酸苄达明通过诱导细菌产生过量的活性氧和抑制谷氨酸脱羧酶系统介导的氧化防御来加剧氧化损伤,这种作用模式也解释了联合用药对不同代谢状态细菌的高效杀菌活性。最后,通过哺乳动物细胞溶血性试验、小鼠体内急性毒性试验和动物感染模型评估了联合用药在体内的安全性及有效性。研究发现,盐酸苄达明与多西环素联用对哺乳动物红细胞没有溶血性,对小鼠没有毒性作用。此外,联合用药有效提高了大蜡螟的存活率,显著降低了小鼠大腿肌肉中的细菌载量,表明盐酸苄达明可以有效地逆转多西环素在体内的耐药性,进而恢复多西环素的临床疗效。综上,本研究发现非甾体类抗炎药盐酸苄达明可以恢复耐药病原菌对四环素类抗生素的敏感性,是一种抗菌谱广且安全有效的新型四环素类增效剂,为多重耐药菌引起的感染性疾病的防治提供了科学依据。