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目的：近年来多项流行病学研究表明,侵袭性真菌感染(IFI)在免疫力低下患者中患病率及死亡率呈逐年上升趋势。侵袭性真菌感染的早期诊断在临床上十分重要,可降低患者相关死亡率,减少相关医疗费用。侵袭性真菌感染临床表现及现有辅助诊断手段常无特异性,病情易被原发病掩盖,造成漏诊、误诊而延误治疗。定量PCR检测具有较高的敏感性和特异性,可以克服现有诊断手段的许多缺点,可监测侵袭性真菌感染病情的发展,及时调整用药。目前PCR检测缺乏国际通用标准,不能区别感染、定植和污染。本研究旨在探讨实时定量PCR及GM检测在恶性血液系统疾病患者侵袭性真菌感染早期诊断中的应用价值。方法：1.选取我院血液科侵袭性真菌感染高危患者40份血清(住院时间自2010年2月至2010年11月),同时收集患者的实验室、组织病理、影像学及治疗效果等资料。根据2008年EORTC/MSG侵袭性真菌感染诊断标准,并以我国制定的血液病/恶性肿瘤患者侵袭性真菌感染的诊断标准与治疗原则为标准,将研究对象分为：确诊、临床诊断、拟诊侵袭性真菌感染及非侵袭性真菌感染者4组。2.本研究以来自我院细菌室2株烟曲霉菌作为阳性对照。采用真菌菌液200μl,采用Qiagen基因组DNA提取试剂盒提取真菌菌液中DNA。将提取的烟曲霉模板DNA通过倍比稀释,测定浓度,进行实时定量PCR检测,由定量PCR仪软件分析,获标准品曲线方程,按标准品曲线方程绘出的标准曲线。3.取侵袭性真菌感染高危患者促凝静脉血清200μ1,采用Qiagen基因组DNA提取试剂盒提取患者血清中的真菌DNA,测定浓度,进行实时定量PCR检测,收集荧光信号。实时定量PCR检测Ct值在15-35范围内作为阳性标准,超过35为阴性。4.取标准阈值血清2份、阳性及对阴性对照血清各1份(试剂盒提供)和患者促凝静脉血清2份,采用Bio-rad公司Platelia Aspergillus试剂盒进行血清GM值测定。每次实验均对试剂盒提供的标准阈值、阳性及对阴性照血清进行测定,标准血清A值均值在0.3-0.8之间,且阳性对照血清A值/标准血清A值>2,阴性对照血清A值／标准血清A值<0.5为质控合格。GM检测结果以单次I值≥0.7或连续2次≥0.5为阳性标准。收集实验数据,分析评价RT-PCR或GM测定对侵袭性真菌感染早期诊断的应用意义。结果：1.定量PCR检测阳性结果：5例确诊侵袭性真菌感染患者有5例,13例临床诊断侵袭性真菌感染患者中11例,9例拟诊侵袭性真菌感染患者中8例,13名非侵袭性真菌感染患者中2例。以确诊和临床诊断侵袭性真菌感染组及排除侵袭性真菌感染组作为阳性及阴性病例,定量PCR检测敏感性为0.89,特异性为0.85,阳性预测值0.89,阴性预测值0.85。不同分组中定量PCR阳性率不同,具体如下：确诊侵袭性真菌感染组为100%(5/5)；临床诊断侵袭性真菌感染组阳性率为84.6%(11/13)；拟诊侵袭性真菌感染组阳性率为88.8%(8/9)；非侵袭性真菌感染组定量PCR阳性率为15.4%(2/13)。2.患者GM检测结果为：32例标本作GM检测,其中20例阳性,分别为确诊侵袭性真菌感染组4例,临床诊断侵袭性真菌感染组11例,拟诊侵袭性真菌感染组3例；而非侵袭性真菌感染组共2例。以确诊和临床诊断侵袭性真菌感染组及排除侵袭性真菌感染组作为阳性及阴性病例,GM检测敏感性为0.83,特异性为0.80,阳性预测值0.88,阴性预测值0.73。不同分组中GM检测结果阳性率不同,具体如下：确诊侵袭性真菌感染组阳性率为80%(4/5)；临床诊断侵袭性真菌感染组阳性率84.6%(11/13)；拟诊侵袭性真菌感染组阳性率为75%(3/4)；非侵袭性真菌感染组阳性率为20%(2/10)。3.联合应用定量PCR检测与GM检测的32例标本实验结果如下：5例确诊侵袭性真菌感染患者中4例出现GM(+),5例出现PCR(+)；13例侵袭性真菌感染患者中11例出现GM(+),11例出现PCR(+)；4例拟诊侵袭性真菌感染患者中3例出现GM(+),3例出现PCR(+)；10例非侵袭性真菌感染组中2例出现GM(+),1例出现PCR(+)。对同一标本同时进行定量PCR检测与GM检测,可见确诊侵袭性真菌感染患者PCR阳性率为100%(5/5),GM阳性率为80%(4/5)；临床诊断侵袭性真菌感染患者PCR阳性率为84.6%(11/13),GM阳性率为84.6%(11/13)；拟诊侵袭性真菌感染患者PCR阳性率为75%(3/4),GM阳性率为75%(3/4)；非侵袭性真菌感染组PCR阳性率为10%(1/10),GM阳性率为20%(2/10)。4.综合分析本次实验中40例标本中定量PCR检测阳性或GM检测结果分析可见,以确诊和临床诊断侵袭性真菌感染组及排除侵袭性真菌感染组作为阳性及阴性病例,定量PCR检测阳性或GM检测阳性结果敏感性为0.94,特异性为0.85,阳性预测值0.89,阴性预测值0.92。结论：1.真菌定量PCR检测结合GM检测可作为恶性血液病患者侵袭性真菌感染的早期诊断方法。2.联合应用定量PCR检测或GM检测,敏感性高于单独应用其中的一种。