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肠出血性大肠杆菌0157:H7是造成严重感染疾病暴发的食源性病原体,在全球每73,000例食源性疾病中约占据2-7%。单增李斯特菌是一种人畜共患食源性致病菌,能导致败血症、脑膜炎等多种疾病,病死率高达30%。传统检测方法费时费力,分子生物学检测方法操作复杂、且容易出现假阳性结果。因此,迫切需要建立快速、稳定的检测方法。本研究针对大肠杆菌0157:H7建立了双抗夹心ELISA检测方法,优化后的最佳检测条件为:选择鸡源多克隆抗体作为捕获抗体,包被量为0.5 μg/孔;封闭液为1%的脱脂乳粉,封闭时间为1.0 h;兔源多克隆抗体作为检测抗体,稀释倍数为1:8000,作用时间为1.0 h:酶标羊抗兔抗体作用时间为0.5 h。该双抗夹心ELISA方法对于大肠杆菌0157:H7菌液检测限为1.7×105 CFU/mL。将人工染菌的牛肉和牛奶作为实际样品验证方法的实用性,在37℃下增菌3 h后检测限分别可以达到101、100 CFU/mL。选择3株大肠杆菌0157:H7、9株非0157大肠杆菌、6株其他菌株进行特异性检测,结果显示,3株大肠杆菌0157:H7均为阳性,其他菌株均没有交叉反应。针对大肠杆菌0157:H7,建立了胶体金试纸条检测方法,经过优化确定最佳实验条件为:采用20 nm的胶体金颗粒;在pH 7.5条件下与兔源多克隆抗体结合为金标抗体固定在金标垫上;最适金标抗体量为15μL/mL;将1.5 mg/mL兔源多克隆抗体包被于T线,5倍稀释羊抗兔抗体包被于C线。对于大肠杆菌0157:H7菌液检测限105 CFU/mL:将人工增菌的牛肉和牛奶作为实际样品,当增菌时间分别为6、7 h时,牛肉及牛奶的检测限可以达到2.5 CFU/25g。此外,本研究还初步建立了单增李斯特菌的免疫检测方法。利用单增李斯特菌表面蛋白,通过小鼠腹腔注射与细胞融合,筛选出了1株分泌抗体特异性良好的杂交瘤细胞,制备了鼠单克隆抗体,效价为810000,特异性良好。利用制备的单克隆抗体和实验室前期制备的多克隆抗体初步建立了单增李斯特菌双抗夹心ELISA方法,经过优化确定最佳检测条件为:利用鼠单克隆抗体作为捕获抗体,包被量为0.5 μg/孔;兔源多克隆抗体作为检测抗体,稀释抗体稀释倍数1:100;0.5%脱脂乳粉在37℃下封闭1.0 h;酶标羊抗兔抗体作用时间为0.5 h。在最佳条件下建立标准曲线,确定方法的检测限为104 CFU/mL。选取5株种内单增李斯特菌、5株李斯特菌属内菌种,以及5株非李斯特菌进行特异性检测,检测结果显示特异性良好。