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目的：原发性肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是血管富集性的肿瘤,其生长及转移和血管生成密切相关,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)是体内一种强有力的促血管生成因子,通过与VEGF受体(VEGFR)结合,引起一系列信号传导,释放各种生长因子和细胞因子,促进内皮细胞的增殖与迁移,直接或间接参与血管生成,在肝癌的发生、发展及预后中具有极其重要的地位。本实验通过筛选VEGF和VEGFR高表达的肝癌细胞株,观察苦参碱等中药有效成分的初步干预作用,旨在构建靶向VEGF/VEGFR信号通路抑制肝癌血管生成的细胞筛选体系,筛选靶向VEGF/VEGFR信号通路抑制肝癌血管生成的药物,为中药现代化及肝癌的药物治疗提供一个新的思路。方法：(1)筛选VEGF和VEGFR高表达的肝癌细胞株：培养人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721和Bel-7402,然后采用免疫细胞化学法检测该三种细胞的VEGF及其受体Fit-1、KDR的表达情况,酶联免疫吸附试验法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)检测细胞培养上清液中VEGF的浓度,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR:Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)技术检测细胞中VEGF mRNA的表达,筛选出VEGF和VEGFR均高表达的细胞株；(2)苦参碱等中药有效成分的初步干预作用：用侯选中药有效成分小檗碱、槲皮素和苦参碱分别干预经过上述实验筛选出VEGF和VEGFR高表达的肝癌细胞株Bel-7402,采用CCK-8试剂盒(cellcounting kit-8)方法检测细胞增殖情况,计算半抑制浓度(IC50),筛选出作用较强的中药有效成分,进一步采用RT-PCR方法检测该中药有成分干预Bel-7402后VEGF mRNA的表达。结果：(1)筛选VEGF和VEGFR高表达的肝癌细胞株：免疫组化可检测HepG2和Bel-7402细胞均具有VEGF、Flt-1和KDR的表达,而SMMC-7721细胞则只具有VEGF和Flt-1受体的表达,而无KDR受体的表达。ELISA检测细胞培养上清液中VEGF蛋白的含量Bel-7402表达最多,SMMC-7721最少。RT-PCR方法检测,Bel-7402中VEGF mRNA表达最多,SMMC-7721的细胞培养上清中VEGF mRNA含量最少(t=6.928,F=0.000)。据此,本研究选定VEGF和VEGFR均高表达的肝癌细胞株Bel-7402作为实验用细胞。(2)槲皮素、苦参碱和小檗碱在溶媒DMSO控制在5‰以下的情况下,对Bel-7402细胞均能起到抑制作用,且有随着药物浓度的增高抑制率增强的趋势,通过CurveExpert1.3软件求得小檗碱、槲皮素和苦参碱的IC50分别为：221.12μg/mL、1186.58μg/mL和78.38μg/mL,苦参碱对Bel-7402细胞增殖的抑制作用最强。RT-PCR方法检测结果表明,苦参碱作用于Bel-740248小时后,VEGF mRNA的表达量明显减少,呈现较好的浓度依赖关系。结论：通过免疫组化、ELISA及RT-PCR对人肝癌细胞株HepG2、 SMMC-7721和Bel-7402的筛选,Bel-7402中VEGF和VEGFR均高度表达,可作为靶向VEGF/VEGFR信号通路抑制肝癌血管生成的细胞筛选体系。苦参碱可明显抑制Bel-7402细胞的增殖,减少VEGF mRNA的表达,初步提示苦参碱可能具有靶向VEGF/VEGFR信号通路抑制肝癌血管生成的作用,有待进一步深入研究。