本试验为了进一步探讨酒精阳性乳患牛乳汁不稳定性的成因及酒精阳性乳的产生机制,作者通过SDS-PAGE电泳对酒精阳性乳患牛脱脂乳中主要乳蛋白组分进行了分离,并通过凝胶成像系统分析了各乳蛋白组分的相对百分含量;同时对酒精阳性乳患牛乳汁中17种氨基酸进行了检测,从蛋白质代谢的角度综合分析了酒精阳性乳患牛乳汁中乳蛋白主要组分变化、氨基酸含量的变化与酒精阳性乳不稳定性之间的关系。采用醋酸纤维素膜电泳对酒精阳性乳患牛血清中主要血清蛋白组分进行了分离,同时也分析了各血清蛋白组分相对百分含量的变化;同时为了研究乳脂肪酸组分变化与酒精阳性乳的发生之间的关系,作者采用气-质联用仪对酒精阳性乳患牛乳汁中脂肪酸组分进行了检测,分析了各脂肪酸组分相对百分含量的变化。实验结果表明:1.脱脂乳经SDS-PAGE电泳分离、考马斯亮蓝染色、凝胶成像系统分析,主要乳蛋白组分从负极至正极依次可显示:血清白蛋白(SA)、免疫球蛋白重链(lgG-H)、α-酪蛋白(α-CN)、β-酪蛋白(β-CN)、κ-酪蛋白(κ-CN)、β-乳球蛋白(β-LG)、α-乳球蛋白(α-LG)等(图1-1)。经凝胶成像系统分析各乳蛋白组分的相对百分含量(%),与正常牛乳相比,酒精阳性乳总乳蛋白变化不显著(P>0.05);总酪蛋白(tCN)含量显著低于正常乳(P<0.05);酪蛋白中的α-CN无显著变化(P>0.05),而β-CN显著增高(P<0.05),κ-CN显著下降(P<0.01)。酒精阳性乳患牛乳汁中主要蛋白组分发生了变化,乳汁中酪蛋白微球的稳定性遭到了严重破坏,乳汁胶体的稳定性降低,导致酒精试验呈阳性反应。2. 17种氨基酸分析显示,与正常乳相比,酒精阳性乳乳汁中大多数氨基酸含量没有显著变化(P>0.05),胱氨酸(Cys)含量极显著降低(P<0.01),而精氨酸(Arg)极显著升高(P<0.01);亮氨酸(Leu)含量显著升高(P<0.05)。Cys在蛋白质中形成二硫键对蛋白质的稳定性起重要作用;Leu带有异丁基,具有较强的疏水性;Arg含有一个带正电荷的胍基, Arg含量增多使微球间的静电斥力减弱,同时对周围离子的吸引力减弱,外周水化层变薄,乳汁的整体稳定性降低。3.血清经醋酸纤维素薄膜电泳分离后,电泳谱带有4条,按迁移率大小依次为清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白(图3-1)。酒精阳性乳患牛血清总蛋白含量、清蛋白/球蛋白(A/G)值都没有显著变化(P>0.05)。血清蛋白组分中,清蛋白、α-球蛋白没有显著的变化(P>0.05);但β-球蛋白相对百分含量极显著升高(P<0.01),γ-球蛋白显著升高(P<0.05)。酒精阳性乳患牛体内血清蛋白组分的这种变化可能是酒精阳性乳患牛体内氧化损伤及甲状腺机能降低所致。4.脂肪酸分析表明,实验中共测定出牛乳中脂肪酸7种,其中饱和脂肪酸(SFA)4种:肉豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、硬脂酸;不饱和脂肪酸3种:棕榈油酸、亚油酸、油酸(图4-1)。酒精阳性乳中总乳脂率与正常乳相比没有显著变化(P>0. 05);乳中总饱和脂肪酸没有发生显著变化,但饱和脂肪酸中十五烷酸与正常牛相比呈极显著升高(P<0.01);酒精阳性乳患牛乳汁中不饱和脂肪酸(UFA)显著上升(P<0.05),同时不饱和脂肪酸中共轭亚油酸(CLA)极显著上升(P<0.01)。亚油酸在动物体内转化为CLA的过程中发生自由基氧化反应,有大量的自由基产生,共轭亚油酸(CLA)含量升高说明酒精阳性乳患牛机体内亚油酸自由基氧化反应强烈,同时机体内抗氧化酶活性下降,从而使机体清除自由基的能力下降,最终造成大量的自由基存在,对乳腺组织造成微损伤,使乳腺组织分泌异常乳,导致酒精阳性乳发生。