羊膜保存方法及其对羊膜活性影响的研究

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目的 观察不同保存方法及保存时间对羊膜活性的影响。方法 取健康剖宫产产妇胎盘,剥离其羊膜,分成2.5×2.5cm~2小块,随机分成四组,每组8块,按四种不同方法保存:甘油4℃保存法、DMEM:甘油-70℃保存法、简化二步深低温保存法、简化一步深低温保存法。保存1、3个月后分别取羊膜行光镜、电镜、酶组织化学[乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)]及免疫组织化学[碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)]观察,并与新鲜羊膜对比。结果 (1)光镜下,甘油4℃保存3个月羊膜上皮层结构不完整,多数细胞破裂、细胞核脱失。保存1个月羊膜组织结构改变较3个月轻。DMEM:甘油-70℃、简化一、二步深低温保存1、3个月的羊膜上皮形态完好。(2)电镜下,DMEM:甘油-70℃保存3个月羊膜上皮细胞线粒体肿胀,嵴断裂,部分线粒体呈空泡样变,部分细胞核染色质边集,保存1个月超微结构改变较3个月轻。简化一、二步深低温保存1、3个月部分线粒体肿胀,细胞核变化不明显。(3)甘油4℃、DMEM:甘油-70℃保存法保存1个月羊膜上皮细胞SDH、LDH活性下降(P<0.05),保存3个月较保存1个月下降明显(P<0.05)。简化一、二步深低温保存1、3个月的两种酶活性与新鲜羊膜比无显著性差异(P>0.05)。(4)bFGF分布于羊膜上皮和基质层,而EGF主要分布于基质层。甘油4℃和DMEM:甘油-70℃保存1个月bFGF在上皮层的表达明显减弱(P<0.05),保存3个月较保存1个月减弱明显(P<0.05)。简化一、二步深低温保存1、3个月其表达与在新鲜羊膜的表达无显著性差异(P>0.05),这两种方法之间也无显著性差异(P>0.05)。结论 甘油4℃和DMEM:甘油-70℃保存的羊膜活性下降,并随保存时间的延长活性下降明显。简化一、二步深低温保存的羊膜能长期保持羊膜活性。简化一步深低温保存法方法简便,更适用于羊膜的保存。
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