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目的本研究拟检测鼻咽癌患者肿瘤组织中miR-25的表达,同时探讨miR-25的表达与患者临床病理参数的相关性,并分析miR-25的表达对鼻咽癌细胞生长、增殖、侵袭过程的影响,探究miR-25信号的活化对于鼻咽癌细胞中RAGE分子表达的调控作用,以及对鼻咽癌细胞侵袭行为的影响,旨在了解鼻咽癌的发生和发展机制,同时为鼻咽癌的临床诊断以及靶向治疗提供可靠依据。方法(1)本研究所用的60例鼻咽癌组织和癌旁相应正常组织样本取自安徽医科大学附属省立医院耳鼻喉科及安徽省铜陵市人民医院耳鼻咽喉科,样本采集时间为2013年5月~2016年8月。所有样本均为鼻咽部活检组织,经病理学检查确诊为鼻咽癌,组织学分型为低分化或未分化型鳞癌。入选的鼻咽癌组织样本来源患者当中,男性为37例,女性为23例;年龄<45岁的患者为29例,≥45岁的患者为31例。所有患者按照TNM临床分期进行划分,其中Ⅰ期为11例、Ⅱ期为18例、Ⅲ期为14例、Ⅳ期为17例;按照T分期进行划分,其中T1~T2期为41例,T3~T4期为19例;按照N分期进行划分,其中N0期为39例,N1~3其为21例。所有鼻咽癌病理组织来源的患者均未接受放化疗治疗。荧光定量PCR检测miR-25在鼻咽癌组织和癌旁正常组织中的具体表达,研究其和鼻咽癌患者病理参数、临床特征之间的关联。(2)设计并合成相关引物,并转染人鼻咽癌5-8F细胞,构建miR-25过表达或抑制表达5-8F细胞的细胞系,进一步检测转染后细胞中miR-25的表达,结果用以验证。随后对上述细胞的增殖活性进行检测转染;克隆形成实验,检测生长情况;同时检测细胞的侵袭能力。(3)筛选miR-25的靶基因,分别检测转染后的5-8F细胞中RAGE mRNA以及蛋白的表达情况。采用定点突变的方法构建RAGE 3’UTR Mut(突变型)质粒载体和RAGE 3’UTR WT(野生型)质粒载体,将两者分别与miR-25 mimic共转染5-8F细胞。检测上述细胞中荧光素酶的表达量。构建RAGE表达抑制的5-8F细胞系,分别检测细胞中RAGE mRNA和蛋白的表达量。将5-8F细胞分为3组,分别检测各组细胞的侵袭能力。结果(1)检测结果表明,鼻咽癌组织中miR-25的表达量显著高于其在癌旁相应正常组织中的表达量(P<0.05)。miR-25与鼻咽癌患者临床病理参数分析结果表明,miR-25的表达与鼻咽癌患者的TNM临床分期、T分期、N分期有关,而与患者的性别和年龄因素无关。(2)检测结果表明,与对照组相比,miR-25 mimic组细胞中miR-25的表达水平明显增高(P<0.05),miR-25 inhibitor组细胞中miR-25的表达量则明显降低(P<0.05),表明其过表达或抑制表达5-8F细胞系构建成功。检测结果显示,转染miR-25 mimic后的5-8F细胞在两天、三天、四天时的增殖率明显高于对照组(P<0.05);而转染miR-25 inhibitor后的5-8F细胞在两天、三天、四天时的增殖率明显低于对照组(P<0.05)。实验结果显示,与对照组相比,miR-25 mimic组5-8F细胞的克隆形成数明显增高(P<0.05);而miR-25 inhibitor组5-8F细胞的克隆形成数则明显减少(P<0.05)。检测结果表明,miR-25 mimic组5-8F细胞的侵袭细胞数均明显高于对照组(P<0.05)。(3)生物信息学软件预测结果表明,RAGE为miR-25的靶基因。分别转染miR-25 mimic后,5-8F细胞中RAGE mRNA和蛋白的表达量明显增高(P<0.05);转染miR-25 inhibitor后,5-8F细胞中RAGE mRNA和蛋白的表达量则明显降低(P<0.05)。相关检测结果表明,miR-25 mimic与RAGE 3’UTR WT共转染组的荧光素酶表达量明显高于对照组(P<0.05);而miR-25 inhbitor和RAGE 3’UTR Mut共转染组细胞中的荧光素酶表达量则与对照组相比无显著差异(P>0.05)。si-RAGE干扰表达后5-8F细胞RAGE mRNA和蛋白的表达量明显降低。与对照组相比,miR-25 mimic组细胞的侵袭细胞数明显增高(P<0.05),然而si-RAGE+miR-25 inhibitor组细胞的侵袭细胞数则明显降低(P<0.05)。结论miR-25在鼻咽癌组织中呈高表达,且其表达量与鼻咽癌患者的TNM临床分期、T分期、N分期有关。miR-25能够通过直接调控RAGE的表达来促进鼻咽癌细胞的侵袭过程,从而促进鼻咽癌的发生和发展。