哮喘是由嗜酸细胞（Eosinophil,Eos）和肥大细胞等多种细胞参与的变态反应性气道慢性炎症。Eos聚积和活化在炎症中起至关重要作用,IL-5对Eos有选择性作用,是最重要的Eos生成素。可溶性IL-5受体α（sIL-5Rα）是重要的负性调节剂,在体外能阻滞IL-5介导的Eos及嗜碱细胞活化,具有抗炎症的潜力。因此,本实验拟将sIL-5Rα应用于哮喘小鼠模型,探讨其在哮喘疾病治疗中的作用。国外有人利用中国仓鼠卵巢细胞（CHO）表达系统表达出了小鼠IL-5R蛋,也有文献报道,用大肠杆菌表达系统表达猪IL-5Rα胞外区段蛋白,但二者表达的蛋白活性和量均不理想。目前毕赤酵母已经成为生产外源蛋白重要表达系统,与其他真核表达系统相比,毕赤酵母拥有许多优点,不仅没有与细菌相关的内毒素问题,也不存在在动物细胞培养过程中生产蛋白时滤过性毒菌引起的蛋白污染。目前在国内外尚未见到小鼠sIL-5Rα基因在毕赤酵母表达系统中获得分泌表达的报道。本实验拟用毕赤酵母表达系统来进行分泌表达目的基因,旨在得到小鼠sIL-5Rα重组蛋白,为进一步研究sIL-5Rα与sIL-13Rα联合应用对哮喘的治疗作用,开发新的哮喘治疗药物奠定基础。目的:克隆小鼠sIL-5Rα基因,并构建其原核表达载体,然后将小鼠sIL-5Rα基因克隆入毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA中,获得能分泌表达sIL-5Rα蛋白的重组酵母菌株。方法:采用RT-PCR的方法从BALB/c小鼠脾脏组织中扩增得到sIL-5Rα基因片段,酶切鉴定后,将该片段插入克隆载体pMD18-T中,构建pMD18-T-sIL-5Rα重组质粒,此重组质粒经过酶切鉴定后,用大肠杆菌DH5α做受体菌,构建pPICZαA-sIL-5Rα重组质粒,将此pPICZαA-sIL-5Rα线性化后插入毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA中,电转化毕赤酵母GS115菌株,抗生素Zeocin浓度梯度筛选高抗性转化子,以PCR鉴定阳性重组菌株。筛选出的高拷贝重组菌株,通过BMGY/BMMY培养基培养,用甲醇诱导表达。采用SDS -PAGE和Western Blotting实验方法检测目的蛋白的表达。结果:从BALB/c小鼠脾脏组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法克隆出sIL-5Rα目的基因片段,片段大小972bp,用EcoRⅠ和KpnⅠ双酶切鉴定和DNA测序的方法均证实克隆获得目的基因sIL-5Rα,通过大肠杆菌做受体菌,最后将该基因成功插入毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA中,并将该重组pPICZαA-sIL-5Rα酵母表达载体成功转染至毕赤酵母GS115菌株。经过SDS–PAGE和Western Blotting检测其蛋白分子量约为36.1kD,符合所要表达目的蛋白的大小,证实该重组毕赤酵母细胞经甲醇诱导后可分泌表达sIL-5Rα目的蛋白。结论:构建了sIL-5Rα基因毕赤酵母分泌型表达载体,获得了重组酵母菌株,能分泌表达目的蛋白sIL-5Rα。