【摘 要】
：
[目 的]研究异粘蛋白（Metadherin,MTDH）在乳腺癌细胞糖酵解过程中的作用,探讨MTDH是否与某种糖酵解关键酶发生相互作用,明确MTDH是否通过该关键酶影响乳腺癌细胞的糖酵解从而调控转移。[方 法]（1）基于癌症基因组图谱（The cancer genome atlas,TCGA）数据库,对MTDH的mRNA表达谱进行差异分析,并分析MTDH表达量与临床病理特征的相关性及MTDH对预后
【基金项目】
：
国家自然科学基金（81860465）；
论文部分内容阅读
[目 的]研究异粘蛋白（Metadherin,MTDH）在乳腺癌细胞糖酵解过程中的作用,探讨MTDH是否与某种糖酵解关键酶发生相互作用,明确MTDH是否通过该关键酶影响乳腺癌细胞的糖酵解从而调控转移。[方 法]（1）基于癌症基因组图谱（The cancer genome atlas,TCGA）数据库,对MTDH的mRNA表达谱进行差异分析,并分析MTDH表达量与临床病理特征的相关性及MTDH对预后的影响。（2）通过转录组测序分析MTDH可能影响的生物学功能,并通过超高效液相色谱-串联质谱法（Ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS）进行非靶向代谢组学分析。（3）在乳腺癌细胞系中通过慢病毒过表达系统、shRNA、CRISPR-Cas9系统分别建立MTDH过表达、敲低或沉默的细胞株。（4）检测以上稳转细胞株的葡萄糖摄取率、葡萄糖-6-磷酸（Glucose-6-phosphate,G6P）含量、NADPH/NADP+比率、乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase,LDH）活性和乳酸产量。并确定MTDH对细胞转移、增殖、凋亡能力的作用。（5）通过免疫沉淀和蛋白质谱检测分析与MTDH存在相互作用的糖酵解关键酶,并通过蛋白免疫共沉淀结合蛋白印迹（Western blotting,WB）进一步验证。利用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）和WB分析MTDH对PGK1表达量的影响。（6）在稳定过表达MTDH的乳腺癌细胞系中用siRNA敲低PGK1,再次检测细胞的一系列生物学功能。[结 果]（1）TCGA数据库中数据提示MTDH在乳腺癌中高表达,MTDH在乳腺癌组织中表达高于其癌旁组织,MTDH表达水平的差异与乳腺癌患者T分期（P=0.037）、N 分期（P=0.007）、ER状态（P=0.003）、PR状态（P=0.005）、分子分型（P=0.011）和组织类型（P=3.274e-18）存在显著相关,而与患者年龄、性别、临床分期、M分期和HER2状态无关（P＞0.05）。（2）转录组测序发现MTDH参与了细胞内糖代谢过程。UPLC-MS/MS结果进一步揭示了 MTDH参与糖酵解过程,尤其在丙酮酸代谢上发挥重要作用。（3）MTDH促进了乳腺癌细胞对葡萄糖的摄取及利用,增加了 G6P的含量、LDH活性及乳酸的产生,并促进NADP+向NADPH转化。此外,MTDH的确能够促进各乳腺癌细胞的增殖、转移并减弱细胞的凋亡能力。（4）蛋白质谱分析及后续WB验证MTDH与PGK1存在相互作用,并且MTDH不改变PGK1在mRNA及蛋白水平的表达。（5）在过表达MTDH的乳腺癌细胞中敲低PGK1,糖酵解相关的一系列指标均下降。并且PGK1敲低后,MTDH促进BT-549乳腺癌细胞转移的功能被阻断。[结 论]MTDH在乳腺癌细胞的糖酵解过程中发挥了重要作用,并且这一过程可能是通过与PGK1发生相互作用促进的,MTDH可通过与PGK1结合进而参与糖酵解并促进细胞转移。
其他文献
[目 的]探索氯氮平治疗精神分裂症过程中miRNAs如何通过调控靶基因影响血糖代谢,为临床用药前风险评估提供证据。[方 法]1、回顾2020年6月1日至2021年5月8日昆明医科大学附属精神卫生中心住院治疗的患者中血糖异常的情况,并分析各诊断血糖异常患者中性别、年龄分布。2、采用miRNAs芯片测序技术在6例样本（在病例组中选取3例单一使用氯氮平治疗的精神分裂症共病2型糖尿病患者,在对照组中选取3
[目 的]研究STIM1在乳腺癌不同亚型,以及与癌旁、正常组织中表达水平的差异,验证STIM1与人体自身免疫通路cGAS-STING的相关性。并在此基础上明确hOrail-259能够通过STIM1激活cGAS-STING通路,以及在三阴型乳腺癌细胞中的生物学功能及其相关作用机制。为乳腺癌的治疗提供新的靶点和思路。[方法]1.收集不同分型乳腺癌患者的癌、癌旁及正常组织样本,同时培养不同分型的乳腺癌细
第一部分压缩感知序列中不同加速因子对实时磁共振成像观察吞咽动作的影响[目 的]使用基于压缩感知技术的实时磁共振序列,通过设置不同压缩感知加速因子,采集正常志愿者吞咽活动的连续动态图像,对比图像质量及变化规律,寻找最适合的加速因子用于吞咽功能的磁共振检查。[受试者及方法]招募吞咽功能无异常且可进行磁共振检查的健康志愿者进行试验。经本院伦理委员会批准,志愿者均签署知情同意书。志愿者纳入标准为:（1）吞
[目 的]探讨GTSE1在非小细胞肺癌组织中的表达水平及其对非小细胞肺癌患者生存期的影响;研究GTSE1通过ERK/MAPK通路调控微管相关蛋白促进非小细胞肺癌细胞生长的作用及机制;初步探索GTSE1对非小细胞肺癌治疗的潜在靶点作用。[方法]1、qPCR检测非小细胞肺癌患者癌组织及配对正常肺组织中GTSE1 mRNA表达水平;回顾性分析非小细胞肺癌患者临床特征及其与GTSE1表达水平的相关性;Ka
[目 的]1.明确干扰素刺激基因15（Interferon-stimulated gene 15,ISG15）对骨肉瘤细胞增殖、迁移及侵袭的作用。2.明确自噬是否能够影响ISG15对骨肉瘤细胞增殖、迁移及侵袭等生物学行为的调控。[方法]1.通过qRT-PCR检测骨肉瘤细胞系143B、U20S、HOS、MG63与正常成骨细胞hFOB中ISG15 mRNA的表达水平差异。2.使用干扰慢病毒载体和过表达
[目 的]探讨肺腺癌中KRAS突变状态与肿瘤浸润性记忆B细胞之间的联系,分析相关机制与共表达基因,及是否有作为预后标志物与免疫治疗预测标志物的可能性。[方法]1.生物信息学分析:（1）通过数据库中转录组测序数据将肺腺癌（Lung adenocarcinoma,LUAD）病例分为两组进行浸润性免疫细胞浸润分数的估算,选择含量较高、差异明显的记忆B细胞（Memory B cell,MBC）进行接下来的
[目的]丁酸是肠黏膜上皮细胞的首要能量来源,主要以丁酸盐形式存在,如丁酸钠（NaB）。丁酸钠具有一定的抗炎和抗肿瘤作用,有研究表明丁酸钠可以通过上调LL-37表达抑制结直肠癌的发生发展,但其具体机制尚未完全明确。本课题拟通过体内、外分子生物学实验,验证丁酸钠对人结肠癌细胞增殖和迁移的抑制作用及其对LL-37表达的调控作用,并探索其具体的分子机制。[方法]1.利用 CCK-8 法检测不同浓度（3.1
[目 的]目前建立的卵巢癌复发风险预测模型很少进行系统的验证,所以在临床中几乎未被使用。此外,部分上皮性卵巢癌（Epithelial Ovarian Cancer,EOC）患者首次复发时会出现远处转移,而目前尚无预测EOC患者术后远处转移风险的临床模型。本研究旨在收集EOC患者的临床资料,筛选影响复发和远处转移的因素,分别建立EOC患者术后复发风险预测模型和远处转移风险预测模型,并进行内部、外部验
[目 的]薯蓣皂苷（Dioscin,Dio）是一种有生物活性的天然皂苷,可从薯蓣科植物中提取,过去被用于治疗心血管、肝脏、炎症等疾病的。近些年,研究者逐步发现薯蓣皂苷有强效的抗肿瘤作用。已有的文献报道显示薯蓣皂苷可以通过诱导细胞周期阻滞、介导线粒体凋亡途径、抑制上皮-间质转化等多种机制而发挥抗肿瘤效果。但目前,薯蓣皂苷对结肠癌的抗癌作用和详细机制尚不明确。我们前期研究发现薯蓣皂苷可通过诱导内质网应
[目 的]研究节律基因Per1对辐射诱导的肺腺癌A549细胞衰老的影响,并通过ATM蛋白活化、细胞周期分布、衰老相关分泌表型等变化探讨其发生的机制。[方 法]1.将过表达Per1的重组慢病毒载体Lv-Per1转染入A549细胞,q-PCR和Western Blot检测Per1过表达效率,建立稳定转染A549P+细胞株,同时建立非特异性序列阴性对照细胞株A549NC。2.SA-β-gal细胞衰老实验