鼻咽癌是一种在中国南方地区发病率较高的恶性肿瘤。尽管鼻咽癌患者体内存在肿瘤特异性T淋巴细胞，而且鼻咽癌组织内往往有大量淋巴细胞浸润，但是大部分中晚期的鼻咽癌病人即使接受了相应的治疗后病情仍然恶化。近年来，鼻咽癌的肿瘤免疫治疗逐渐成为研究热点。为了发挥肿瘤免疫治疗的最佳疗效，人们必须对影响免疫治疗效果的肿瘤免疫耐受机制有一个清楚而全面的认识。因此，为了阐明鼻咽癌患者体内的肿瘤免疫耐受机制，寻找浸润的淋巴细胞无法清除鼻咽癌细胞的原因，本研究主要探讨了吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)在鼻咽癌中的表达特性以及鼻咽癌表达IDO对淋巴细胞杀伤活性的影响，以期为更合理地设计鼻咽癌的肿瘤免疫治疗方案提供一定的理论依据。 主要研究包括以下三个部分： 一、IDO蛋白表达检测和酶活性分析方法的建立 通过制备兔抗人IDO多克隆抗体和建立检测IDO降解色氨酸所得的特异性代谢产物犬尿氨酸的高效液相色谱法(HPLC)，本部分检测了多种肿瘤细胞和组织内IDO的表达情况。结果显示，所制备的抗体效价高、特异性好，适用于在免疫印迹法(WB)和免疫组化法(THC)中检测肿瘤细胞内和组织内IDO蛋白的表达情况；所建立的定量检测犬尿氨酸的HPLC快速、简便，适于大批量样品的检测。本部分为检测细胞内IDO的蛋白表达和酶活性奠定了基础。 二、IDO在鼻咽癌中的表达特性 利用IHC、WB和HPLC，本部分检测了IDO在鼻咽癌组织中表达、γ干扰 素(IFN-γ)对CNE2鼻咽癌细胞内IDO蛋白表达和酶活性的影响以及激活的淋巴细胞对CNE2细胞内IDO蛋白表达的影响。结果显示，鼻咽癌患者肿瘤组织中存在IDO的表达；CNE2细胞在IFN-γ和激活的淋巴细胞的作用下能表达IDO；IFN-γ浓度低至5 U·ml-1就能诱导CNE2细胞表达IDO；CNE2细胞在IFN-γ作用下8小时后即能表达IDO，而且CNE2细胞内的IDO一旦被合成，蛋白不易降解，可在细胞内稳定存在达72小时；CNE2细胞内IDO酶活性随着IFN-γ浓度的提高而增强。本部分对IDO在鼻咽癌中的研究在国内外尚属首次。 三、鼻咽癌细胞表达IDO对淋巴细胞的影响 本部分主要模拟机体内的肿瘤细胞和淋巴细胞相互作用的微环境，观察IFN-γ对鼻咽癌细胞增殖的影响、人淋巴细胞在IDO高表达环境中的凋亡情况、释放IFN吖情况以及对肿瘤细胞的杀伤能力，同时运用IDO抑制剂1-MT，观察抑制IDO的活性对淋巴细胞杀伤活性的影响。MTT法和[3]-TdR掺入法的实验结果显示，IFN-γ对CNE2鼻咽癌细胞的增殖无明显抑制作用；Annexin V染色检测法和WB结果显示，IDO的表达对T淋巴细胞的凋亡和淋巴细胞释放IFN-γ的能力并无明显影响；LDH释放检测的实验结果显示，人外周淋巴细胞在IDO高表达的环境中对肿瘤细胞的杀伤活性明显降低，给予1-MT能使人外周淋巴细胞在IDO高表达的环境中对肿瘤细胞的杀伤活性大部分恢复至正常水平。本部分结果提示我们，鼻咽癌细胞可通过表达IDO使淋巴细胞杀伤能力减弱而导致鼻咽癌患者产生肿瘤免疫耐受，这可能是浸润到鼻咽癌组织的淋巴细胞无法有效清除肿瘤细胞的重妻原因之一。 综上所述，这些结果初步证实了IDO介导的肿瘤免疫耐受机制在鼻咽癌发病过程中起了重要的作用。