一、研究目的解毒化瘀汤由溪黄草、虎杖、白花蛇舌草、赤芍、田基黄、云苓、甘草等药物组成,具有清热解毒、活血化瘀作用,临床上主要运用于肝胆湿热型的病毒性肝炎患者的治疗,既往的临床和实验研究均显示该复方具有较好的抗肝损伤作用。本研究针对病毒性肝炎发病的免疫学机制,采用刀豆蛋白A(Concanavalin,Con A)诱导的免疫性肝损伤模型,从肝组织及超微结构的保护、过氧化损伤及免疫调节等途经,评价解毒化瘀汤对肝损伤的保护作用效果,并探讨其作用机制,为其临床应用和开发提供实验依据。二、实验内容1.解毒化瘀汤抗免疫性肝损伤的实验研究72只雄性NIH小鼠,随机分为6组,每组12只,分别为正常对照组,模型组,解毒化瘀汤高、中、低剂量组(剂量分别为72.0g/kg、36.0g/kg、18.0g/kg),联苯双酯对照组(150mg/kg)。受试组及联苯双酯对照组小鼠均灌胃给药,每天1次,共5天。除正常对照组外,其余小鼠于实验首日上午尾静脉注射Con A 20mg/Kg,并于首日、次日和第3日、第4日下午各给药一次,第5天给药后2h,模型组和各给药组小鼠再次尾静脉注射Con A 20mg/kg,8h后检测血浆谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性和肝组织病理改变。结果显示解毒化瘀汤高、中、低剂量组血清ALT、AST活性均明显低于模型组,差异均有显著性意义(P<0.01);解毒化瘀汤高剂量组血清ALT、AST活性均明显低于低剂量组(P<0.01);解毒化瘀汤高、中、低剂量组血清ALT活性与联苯双酯组比较,差异均无显著性意义(P>0.05),但高剂量组血清AST活性明显低于联苯双酯组(P<0.05)。解毒化瘀汤高、中、低剂量组肝组织病理改变明显减轻。提示解毒化瘀汤对Con A所致小鼠肝损伤具有较好的保护作用。2.解毒化瘀汤抗免疫性肝损伤作用机理的研究2.1解毒化瘀汤对免疫性肝损伤小鼠SOD、MDA、ICAM-1、Fas、FasL和IL-6的影响60只雄性NIH小鼠,随机分为5组,每组12只,分别为正常对照组,模型组,解毒化瘀汤高、低剂量组(剂量分别为72.0g/kg、18.0g/kg),联苯双酯(150mg/kg)对照组。除正常对照组外,其余小鼠于实验首日上午尾静脉注射Con A 20mg/Kg,并于首日、次日和第3日、第4日下午各给药一次,第5天给药后2h,模型组和各给药组小鼠再次尾静脉注射Con A 20mg/kg,禁食不禁水,8h后取血和肝组织,检测血清ALT、IL-6、肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量变化、肝组织ICAM-1、Fas和FasL的表达,观察肝组织病理改变。解毒化瘀汤提取物高、低剂量组血清ALT、IL-6活性均明显低于模型组(P<0.01、0.05),且高剂量组血清ALT活性明显低于低剂量组,差异有显著性意义(P<0.01),与联苯双酯对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。解毒化瘀汤高、低剂量组肝组织SOD活性均明显高于模型组(P<0.05、0.01);解毒化瘀汤高、低剂量组与联苯双酯组比较,差异均无显著性意义(P>0.05);解毒化瘀汤高剂量组肝组织SOD活性明显高于低剂量组,差异有显著性意义(P<0.05)。解毒化瘀汤高、低剂量组肝组织MDA含量均明显低于模型组(P<0.01);解毒化瘀汤高剂量组与联苯双酯组比较,差异无显著性意义(P>0.05);解毒化瘀汤高剂量组肝组织MDA含量明显低于低剂量组,差异有显著性意义(P<0.01)。解毒化瘀汤液高、低剂量组肝组织病理改变明显减轻,肝组织ICAM-1、Fas和FasL的表达较模型组明显减少,差异均有显著性意义(P<0.05),提示解毒化瘀汤对刀豆蛋白A致小鼠免疫性肝损伤模型,具有较好的降低血清ALT水平作用,并可显著减轻肝组织病理改变,其抗肝损伤机制与抗脂质过氧化的损伤、抑制ICAM-1、Fas和FasL的表达和IL-6的释放密切相关。2.2解毒化瘀汤对免疫性肝损伤小鼠血清TNF-α活性和肝组织超微结构的影响50只雄性NIH小鼠,随机分为5组,每组10只,分别为正常对照组,模型组,解毒化瘀汤高、低剂量组(剂量分别为72.0g/kg、18.0g/kg)、联苯双酯对照组(150mg/kg)。除正常对照组外,其余小鼠于实验首日上午尾静脉注射Con A 20mg/Kg,并于首日、次日和第3日、第4日下午各给药一次,第5天给药后2h,模型组和各给药组小鼠再次尾静脉注射Con A 20mg/kg,禁食不禁水,4h后,每组取相同序号小鼠8只,摘眼球取血,离心分离血清待检;每组所剩2只小鼠,8h后处死取肝组织,3%戊二醛固定,切片,染色后,透射电镜观察肝组织超微结构。结果显示模型组TNF-α活性较正常组明显升高(P<0.01),肝组织超微结构发生了显著改变,肝细胞严重肿胀、线粒体破坏、毛细胆管和肝窦腔结构明显变形、中性粒细胞滞留,细胞及细胞器的完整性遭到破坏。解毒化瘀汤高、低剂量组血清TNF-α活性均明显低于模型组,差异均有显著性意义(P<0.01)。肝组织超微结构虽有一定程度改变,但细胞及细胞器的形态及完整性得到保护,提示解毒化瘀汤具有较好的保肝作用,其作用机理与抑制TNF-α的产生密切相关。三、结论1.解毒化瘀汤对刀豆蛋白A所致小鼠免疫性肝损伤具有较好的保护作用。2.解毒化瘀汤对刀豆蛋白A所致小鼠免疫性肝损伤具有较好的保护作用,其抗肝损伤机制与抗脂质过氧化的损伤、抑制ICAM-1、Fas、FasL表达和IL-6过多的分泌密切相关。3.解毒化瘀汤对刀豆蛋白A所致小鼠免疫性肝损伤肝组织超微结构具有明显的保护作用,其作用机理与抑制TNF-α的产生密切相关。