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中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis),俗称河蟹,属于节肢动物门,甲壳纲,十足目,是我国五大经济蟹类之一。对甲壳动物来说,只有通过不断的蜕皮才能完成其生长发育,而蜕皮是一个非常复杂的生理过程,不仅受到神经系统的调节,而且也受到内分泌系统的影响。中华绒螯蟹蜕皮抑制激素(molt inhibiting hormone,MIH)属于神经多肽类激素,在甲壳动物蜕皮过程中发挥着重要的作用,与蜕皮激素(molt hormone,MH)共同调节其蜕皮过程。研究MIH不但可以更深入了解它对蜕皮机制的影响,并且可以对生产实践提出理论性的指导。本实验利用基因重组技术成功构建了MIH原核表达载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了大量表达。通过对大量表达的菌体进行超声破碎,并分别纯化离心后的上清和包涵体沉淀,发现原核表达的MIH重组蛋白以包涵体形式存在;用8M尿素溶解包涵体,并利用镍柱亲和层析法进行纯化,然后用该蛋白进行小鼠免疫,免疫完成后应用间接ELISA法检测抗血清效价达到1:10000以上,说明该免疫的小鼠适合用于细胞融合实验。细胞融合实验中,应用间接ELISA方法进行阳性杂交瘤细胞检测,共检测到13个阳性孔,其中6个强阳性孔;利用有限稀释法进行亚克隆,通过3次亚克隆最终筛选到1株稳定分泌抗体的单克隆杂交瘤细胞株,间接ELISA法检测效价达到了1:51200;用该株细胞诱生小鼠腹水大量制备单克隆抗体,得到的单克隆抗体效价达到了1:102400,浓度为2.8 mg/mL。Western blot实验结果证明制备的MIH单抗能够很好的和中华绒螯蟹内源分泌的MIH进行结合。应用免疫荧光技术,将制备的单克隆抗体用于MIH在视上神经节中表达特征的研究,结果显示:神经分泌细胞类型1、2、3和4均参与了MIH的分泌。