【摘 要】
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本研究成功建立了犬贾第虫携病毒株体外纯培养;并对犬贾第虫病毒全基因组序列进行了测定,将该基因组登陆GenBank获得的登陆号为DQ238861;在此基础上根据GCV基因组(DQ238861)
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本研究成功建立了犬贾第虫携病毒株体外纯培养;并对犬贾第虫病毒全基因组序列进行了测定,将该基因组登陆GenBank获得的登陆号为DQ238861;在此基础上根据GCV基因组(DQ238861)的转录起始位点、复制起始位点及包装位点的序列特征和表达外源基因的顺式作用元件,构建了犬贾第虫病毒转染载体,并在犬贾第虫体内成功表达了绿色荧光蛋白基因;将两端携带反义KRR1基因的锤头状核酶插入到犬贾第虫病毒转染载体pGCV634/GFP/GCV2174中,构建两个核酶嵌合型犬贾第虫病毒载体KRzS和KRzL,其体外转录体对KRR1基因体外转录RNA切割效率分别为73.99%和81.14%;体内试验表明KRzS和KRzL对KRR1基因表达抑制效果显著,最高可分别达86%和67%。犬贾第虫滋养体转染后4d内,转染两组虫体细胞数量显著低于正常对照组细胞(P<0.01);电镜观察显示转染虫体核糖体数量明显少于正常细胞,且核糖体淡染,明暗反差小,细胞结构模糊,虫体变形。表明KRR1基因表达量的降低对虫体的生长、细胞形态、超微结构均有显著影响。本试验为深入研究KRR1蛋白在犬贾第虫体内生理功能,犬贾第虫病毒载体在贾第虫细胞生物进化和分子生物学等研究中的应用奠定了基础。
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