论文部分内容阅读
目的和背景：脑出血(intracerebral hemorrhage，ICH)是脑血管疾病中的危重类型，是目前临床的常见病和多发病。属于祖国医学“中风”范畴。自清代著名医家王清任提出气虚致瘀的观点，并创立益气活血代表方补阳还五汤以来，益气活血法在脑出血中得到了广泛的临床应用且疗效肯定。现代医学研究证明，补阳还五汤具有增加脑血流量，改善脑组织循环，促进血肿吸收和创伤愈合的作用。然而，脑出血后血肿局灶性的机械破坏和炎症介导的广泛血管内皮细胞损伤，导致损伤区微血管系统的严重破坏，只有通过血管新生启动损伤区微血管网重建，才能改善损伤区微循环组织的血液灌流。在微血管系统重建过程中，血管生成因子发挥了重要的介导作用，目前已发现主要包括内皮细胞特异性的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)家族、促血管生成素(angiopoietin，Ang)家族和多效性血管因子(Pleiotropic Angiogenic Factors)，其中促血管生成素-1(angiopoietin，Ang-1)是一族特异性作用于血管内皮细胞的生长因子之一，具有免疫球蛋白和表皮生长因子同源性结构域的酪氨酸蛋白激酶-2(tyrosine kinase that contains immunoglobulin-like loops and epidermal growth factor-similar domains-2，Tie-2)为Ang-1内皮特异性酪氨酸激酶受体；Ang-1以旁分泌形式与Tie-2受体结合，触发血管内皮细胞和血管周细胞相互作用，促进血管稳定和成熟并维持成熟血管的完整性及静息状态。据此，我们推测益气活血法可能在脑出血后通过影响Ang-1及其受体Tie-2的表达，对促进血管的稳定成熟、血肿的吸收以及微循环的改善起一定作用。本实验拟通过研究益气活血法对脑出血大鼠脑内损伤区Ang-1及其受体Tie-2表达的影响，初步探讨益气活血法在脑出血后对脑内血肿区微血管重建中的作用机制。方法：288只大鼠随机分成6组：正常组，假手术组，模型组，益气组，活血组，益气活血组。用Ⅶ胶原酶脑内立体定位注入大鼠右侧苍白球(前囟后1.40mm，矢状缝右3.20mm，深5.60mm)内复制大鼠脑出血模型，益气组、活血组与益气活血组分别予益气药(8.10g／kg.d)、活血药(7.30g／kg.d)及补阳还五汤(15.40g／kg.d)灌胃。复制脑出血模型后1d、2d、4d、7d、14d、21d、28d麻醉大鼠，经心脏灌注、固定、取脑、脱水、切片。常规(hematoxylin eosine staining，HE)染色，观察大鼠脑组织基底节区的阳性血管段、血肿形态及其周围的水肿带、炎性细胞浸润和胶质细胞的表达情况以及益气活血法的影响；免疫组织化学法检测1、2、4、7、14、21和28天血管生成素Ang-1和其受体Tie-2的表达情况和益气活血法的影响。结果：1．HE染色观察大鼠脑组织形态学改变：HE染色显示对照组及假手术组各时间段取材未见血肿及局部明显病理学改变，模型组4d，组织明显水肿、坏死，炎性细胞浸润以圆形的淋巴细胞为主，并可见少量中性粒细胞，血肿的外缘可见含铁血黄素沉积，部分神经元水肿变性，其余三组4天时组织水肿及炎性浸润较模型组稍轻，且血肿周围有少量不规则的微血管段出现，其表达以益气活血组最为明显；在14d时模型血肿周围可见不规则新生血管，红细胞基本溶解，血肿边缘出现散在的胶质细胞，至21d，血肿基本消失。而益气活血组血肿消失时间提前到14天，血肿区可见明显血管段成条索状，对应出现管腔扩大，血肿区血管阳性段的表达较其它三组最为明显。2．免疫组化法检测结果：Ang-1血肿周围基底节血管周围细胞表达：正常对照组及假手术组不同时间点Ang-1及其受体偶见零星、散在表达，健侧和患侧分布无明显区别。模型组大鼠脑内血肿周边Ang-1阳性血管段1天后开始出现，4天后明显增多，到21天达到高峰，28天明显减少；益气组的阳性血管段从4天开始在相应时间点较模型组比较有所增强；活血组的阳性血管段从2天开始在在相应时间点多于前两组水平(p＜0.01)，到14天时提前达到高峰，并表达高于模型组和益气组(p＜0.01)；益气活血组1天即开始多于其他三组相应时间点的水平(p＜0.01)，14天达到高峰，28天表达开始下降，但较其他三组仍维持最高(p＜0.01)。Tie-2血肿周围基底节血管周围细胞表达：正常组和假手术组见散在、少量Tie-2阳性表达，分布在血管周围细胞，健侧和患侧分布无明显区别。模型组大鼠脑内血肿周边Tie-2阳性血管段1天后开始出现，4天后明显增多，14天到21天出现高峰平台期，28天明显减少；益气组的阳性血管段从2天开始在相应时间点较模型组比较有所增多；活血组和益气活血组的阳性血管段从1天开始在相应时间点多于前两组水平(p＜0.01)，14天提前达到高峰，并表达高于模型组和益气组(p＜0.01)；益气活血组在各个相应时间点高于活血组表达的水平(p＜0.01)，28天表达开始下降，但表达水平仍较其它三组高(p＜0.01)。结论：1．脑出血后血管周围Ang-1和受体Tie-2表达上调，在观察的时间段内呈现为随时间顺序先升高后下降的趋势。2．益气活血法能促进Ang-1和受体Tie-2表达，并延缓其下降，维持相对稳定的水平，提示该治法有助于促进损伤区微血管生成和稳定，恢复病灶血液供应，促进脑出血大鼠神经功能的恢复。