COBRA和QM-PCR法检测乳腺癌中PANDAR基因DNA甲基化

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huangshuhui1983
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[目的]通过联合亚硫酸氢钠的限制性内切酶分析法技术(COBRA),定性检测乳腺癌及癌旁正常组织中PANDAR基因DNA甲基化的情况,再通过荧光定量甲基化PCR (QM-PCR)技术对乳腺癌和癌旁正常组织中PANDAR基因DNA甲基化数值进行定量检测并分析,探讨PANDAR基因在乳腺癌中DNA甲基化的临床意义。[方法]收集乳腺癌及癌旁正常组织30对,所采集癌旁正常乳腺组织距离肿块至少不小于5cm,并且可在不同象限取材,分别提取DNA,采用联合亚硫酸氢钠的限制性内切酶分析法(COBRA)检测乳腺癌组织和癌旁组织的PANDAR基因DNA甲基化的大致情况,采用QM-PCR技术对乳腺癌组织和癌旁正常组织PANDAR基因DNA甲基化的程度定量检测,使用spssl7.0软件对实验数据进行处理,结果行统计学分析。[结果]1. COBRA技术检测30例乳腺癌组织中以及癌旁正常组织中,经Bsp119I酶酶切后乳腺癌组织中PANDAR出现DNA甲基化程度高于50%的有28例,甲基化程度低于50%的有2例。P=1;经HinfI酶酶切后乳腺癌组织中PANDAR出现DNA甲基化程度高于50%的有30例,甲基化程度低于50%的有0例。P=1>0.05,差异均无统计学意义。2.经过荧光定量甲基化PCR (QM-PCR)技术检测30例乳腺癌组织中以及癌旁正常组织中,PANDAR基因出现DNA甲基化的比例为74%,癌旁正常组织出现DNA甲基化的比例为68%, P=0.0069<0.05,差异有统计学意义。[结论]1.在30例乳腺癌组织中可见PANDAR基因启动子CpG岛甲基化水平高于癌旁正常组织。以上结果提示:DNA甲基化与PANDAR基因在乳腺癌组织中高表达是有相关性的。2.乳腺癌组织中PANDAR基因DNA甲基化的水平较癌旁正常乳腺组织明显升高,PANDAR基因启动子CpG岛的甲基化状态与该基因在乳腺癌组织中高表达有关,提示PANDAR基因DNA甲基化可能是一个较有价值的分子标志,其甲基化水平可能会成为检测乳腺癌的新的特异性指标,在乳腺癌的发生过程中起重要作用,并可能成为治疗乳腺癌的特异性潜在生物靶点。
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