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目的:检测卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s Sarcoma-associated Herpesvirus,KSHV)能否在体外感染神经元细胞SH-SY5Y,检测感染与未感染神经元细胞的增殖、迁移等特点并筛选差异表达基因。方法:(1)体外常规培养islk.219细胞,采用强力霉素与丁酸钠诱导其释放KSHV病毒于上清液中,采用病毒浓缩法提取KSHV,并用其感染神经元细胞SH-SY5Y,48h后采用荧光显微镜观察确定感染成功,并观察细胞形态变化。(2)采用实时定量PCR(real-time-PCR,RT-PCR)检测KSHV潜伏态基因潜伏相关核抗原(Latency-associated Nuclear Antigen,LANA)与裂解态基因ORF26、K8.1A、RTA的m RNA表达水平。(3)采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)检测了KSHV潜伏态基因LANA与裂解态基因RTA、K8.1A的表达水平。(4)采用MTT和Transwell检测KSHV对细胞增殖及迁移能力的影响,采用流式细胞技术检测感染与未感染SH-SY5Y细胞的细胞周期,采用Western Blot检测细胞周期蛋白CDK4、CDK6、Cyclin D1、P27的表达水平,在SH-SY5Y细胞中,转染LANA质粒后,进一步比较CDK4、CDK6、Cyclin D1、P27的表达水平。(5)利用转录组测序技术筛选KSHV感染SH-SY5Y细胞后的差异基因,采用Gene Ontology、KEGG等生物信息技术对测序结果进行了分析,并对Notch信号通路活性进行了检测。结果:(1)成功诱导islk.219细胞产生KSHV病毒,荧光显微镜观察到KSHV在体外感染神经元细胞SH-SY5Y后的绿色荧光,确定感染成功;感染后细胞形态由梭形聚团生长改变为细胞变大,形态变圆和分散生长;(2)KSHV感染SH-SY5Y细胞后潜伏态基因LANA与裂解态基因RTA、ORF26、K8.1A的m RNA及蛋白表达水平显著提高(P<0.05)。(3)KSHV感染神经元细胞SH-SY5Y后,增殖能力显著提高,迁移能力减弱。细胞周期结果显示KSHV感染后能促进细胞G0/G1期进展。细胞周期蛋白Cyclin D 1、CDK 4和CDK 6的表达水平升高,P27的表达水平降低。LANA质粒转染进SH-SY5Y细胞后,Cyclin D 1、CDK 4的表达水平升高。(4)转录组测序检测到KSHV感染SH-SY5Y后,11258条基因表达上调,1967条基因表达下调,KEGG pathway提示Notch信号通路相关性较强,Western Blot检测发现KSHV感染的SH-SY5Y细胞中Notch信号通路蛋白Notch1、NICD及其下游基因RBP-JK、Hes 1的表达水平显著提高(P<0.001)。结论:(1)KSHV能够在体外成功感染神经元细胞SH-SY5Y,并表达其潜伏态与裂解态相关蛋白。(2)KSHV感染神经元细胞后促进其增殖,细胞迁移能力减弱。(3)KSHV感染神经元细胞后上调了Notch信号通路相关蛋白的表达,这可能与促进细胞增殖能力相关。