血细胞计数是最常规的临床检测之一,对疾病的初步诊断和筛查具有重要的指导意义。大量研究显示,基于流式或成像的便携式血细胞计数仪器具备准确的血细胞计数能力,但这些方法普遍存在的问题是:简单的实验操作只能获得单一的参数,或者需要使用多种试剂来进行复杂的样品前处理,或者需要多个仪器部件来实现多个参数的检测。本课题组前期开发了一套基于血细胞大视场成像的小型显微镜系统,实现了对血细胞的准确计数,但该方法采用了表面活性剂与荧光染料分别对血样进行红细胞球化和白细胞、血小板染色,它们的混合物对染色的荧光强度造成较大影响。同时,该方法进样时使用的是商业样品池,其厚度为精确的100μm,价格较为昂贵。这样的样品制备方法达不到便携式检测的实际需求。为了解决这个问题,我们开发了一套面向便携式血细胞计数的简单、高效的样品制备方法,其主要内容包括:(1)选择两性表面活性剂N,N-二甲基-N-(3-磺丙基)-1-十八烷铵内盐(DOPS),代替阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)。DOPS对白细胞和血小板荧光染色的强度没有影响,因此与荧光染料具有良好的兼容性。同时,DOPS可以将红细胞球化成规整形态,且适用的血样具有较宽的血细胞密度范围。通过调整DOPS的浓度,结合染色剂浓度、环境pH及盐离子浓度的优化,我们确定了最佳的血样制备条件。(2)通过调节血液稀释倍数和控制样品池深度,设计样品池,使血细胞形成密度适中的单层分布。实验结果表明,这种样品池的效果不仅可以替代商业样品池,还较大幅度的降低了成本。将其与前述血样制备的最佳条件相结合,我们实现了血样的快速制备,以及红细胞、白细胞和血小板的准确计数。(3)将DOPS与荧光染料吖啶橙(AO)以干剂形式预埋在离心管中,这种预储存的策略,使试剂储存时间增长,保证了样品制备的的重现性,并且可实现多个参数的检测。该方法可进一步推进大视场显微成像的技术应用于便携式血细胞计数的检测。