小鼠胚胎分割和分割胚体外培养的研究

来源 :西南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiomantou_3737
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本试验以昆明白小鼠为实验动物,试采用FSH和LH进行超排处理,确定了该处理程序下获取桑椹胚、囊胚的恰当时间,比较了三种方法对桑椹胚和囊胚分割的效果,采用了添加不同浓度FCS、MS的4种培养基对分割胚进行体外培养,并进行了半胚移植。研究结果如下: 1.试验中采取四种剂量的FSH+LH组合(FSH分四次递减量腹腔注射,LH一次腹腔注射)对小鼠进行超排处理。结果9IU FSH+9IU LH组处理效果最好,平均每只小鼠获可用胚30.71(645/21)枚,并显著高于其它三组的效果。 2.采用FSH+LH组合对小鼠进行超排处理。通过注射LH后不同时间点处理有栓鼠取胚结果可知,形成桑椹胚和囊胚的主要时间分别集中在注射LH后的66h~81h(尤其是69h~78h)和84h~87h。 3.将获取的桑椹胚和囊胚,借助显微操作仪采用显微分割刀、显微玻璃针进行分割和以显微玻璃针为工具进行徒手分割。分割结果表明:借助显微操作仪时,不论是以显微分割刀为工具,还是以显微玻璃针为工具,其成功率(桑椹胚93.0%,90.0%,91.5%,91.1%;囊胚90.5%,93.0%,90.2%,94.0%)都高于徒手分割的成功率(桑椹胚87.7%,88.2%;囊胚87.7%,89.6%);但经检验,三种分割方法的成功率间无显著性差异。 4.以D-PBS、mTCM199、CZB、mM16为基础培养液,分别添加10%、20%的FCS、MS(Mouse Serum,小鼠血清)对半胚进行培养的结果是:桑椹胚半胚的囊胚率(平均值,下同)33.70%~79.30%,囊胚半胚的囊胚率41.95%~79.20%。分析各组培养中半胚的囊胚发育率,可以发现:在相同基础培养基中,添加相同比例FCS、MS的培养效果总体上无显著差异;在基础培养基和血清种类相同的情况下,添加20%血清对半胚的培养效果优于添加10%血清的效果,但两者效果间无显著差异。 5.选取体外培养24h,形态发育良好的半胚囊胚进行移植;每只受体移植20枚胚胎,每侧子宫移植10枚;共移植13只受体,其中6只妊娠,总妊娠率46.2%(6/13);共产仔33只,总产仔率12.7%(33/260)。移植结果证明:桑椹胚和囊胚分割成功率和其半胚体外培养的囊胚形成率都比较高,但是移植体内后进一步发育成功的几率很低。对比宫-管结合部打孔移植法和子宫壁打孔移植法,在产仔率上,前者显著性优于后者(18.3% vs 7.9%)。
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