藏药绿萝花活性成分及其降血糖活性研究

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藏药绿萝花为瑞香科(Thymelaeaceae)结香属植物滇结香(Edgeworthia gardneri)的花蕾,西藏当地人常将绿萝花热水冲泡,作为花茶饮用来预防和治疗糖尿病、高血脂和高血压等慢性疾病。本论文采用各种色谱和波谱技术以及相关的体内外活性研究,对绿萝花的有效降糖化学成分及其生物活性进行了系统研究。研发工作主要包括以下几方面:1、本研究用纯甲醇对绿萝花进行提取,用纯净水将绿萝花的粗浸膏分散,并将分散后的粗浸膏萃取,得到石油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相极性不同的三部分提取物,并综合采用各种色谱技术对乙酸乙酯和正丁醇部分进行了分离纯化,得到13个化合物。分别为10个香豆素类化合物(1,3-5,7,9-13)、1个黄酮(8)、1个苯丙素(2)和1个木脂素(6),其中包括1个新化合物。2、本文对分离得到的13个化合物进行了?-葡萄糖苷酶和?-淀粉酶抑制活性测试,实验结果显示:化合物3对?-葡萄糖苷酶的抑制活性最好,IC50值为12.02μg/mL。化合物8对?-淀粉酶的抑制活性最好,IC50值为18.7μg/mL。相对于对?-淀粉酶的抑制作用,绿萝花中的香豆素类化合物对?-葡萄糖苷酶具有更有效的抑制作用。3、本文对化合物3的?-葡萄糖苷酶抑制动力学进行了研究,表明化合物3对?-葡萄糖苷酶的抑制类型是非竞争性抑制。根据米氏动力学方程可以计算出其抑制常数为53.82μM。此外还通过荧光淬灭的方法研究了化合物3与?-葡萄糖苷酶之间的相互作用,结果表明化合物3与?-葡萄糖苷酶的反应改变了Trp残基的微环境,并且使?-葡萄糖苷酶的构象发生了改变。根据Stern-Volmer方程从而计算出结合常数Ka和结合位点n,并由范特霍夫方程得到化合物3与?-糖苷酶的相互作用主要是疏水作用,是一个自发的过程。4、本文对绿萝花中含量最高、活性较好的化合物8的?-淀粉酶抑制动力学进行了研究,结果表明,化合物8是一种非竞争性抑制剂。根据米氏动力学方程计算出其抑制常数(Ki)的值为9.72μM。为了深入研究其降糖效果,本研究对化合物8进行了小鼠体内活性研究,即探索了化合物8对昆明小鼠淀粉耐量实验,实验结果表明,化合物8(300 mg/kg)对正常小鼠淀粉负荷糖耐量有明显的改善作用(P<0.05)
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