慢性肾衰竭(Chronic renal failure,CRF)是指各种原发性或继发性慢性肾脏病(Chronic kidney disease,CKD)导致的进行性肾功能损害。慢性肾功能衰竭终末期在临床上多采用肾脏移植手术和透析治疗,但由于费用昂贵、肾源不足、患者认知和依从性差以及各种严重并发症问题,难以广泛推广,并且此类解决方法不适合早、中期的CRF患者。近年来,中医药广泛应用于慢性肾功能衰竭患者,特别是针对早、中期的CRF,表现出良好的效果。因此,研究和开发中药治疗CRF,具有重要的理论研究价值和实际应用潜力。兰坪虫草(Ophiocordyceps lanpingensis)属于线虫草属真菌,与冬虫夏草(Ophiocordyceps sinensis)亲缘关系较近,是近几年在我国滇西北地区发现的线虫草属新种,其所含活性成分与野生冬虫夏草相似,且易于人工培养。在云南省的兰坪虫草产区,当地少数民族长期使用兰坪虫草治疗呼吸系统、泌尿系统疾病,用法与冬虫夏草相同。兰坪虫草与冬虫夏草相比具有更好的可人工培育特性,容易实现规模化培养。因此,兰坪虫草具有作为冬虫夏草代用品入药的潜力。本研究旨在探讨人工培养的兰坪虫草菌粉及其水提物对慢性肾功能衰竭小鼠的改善作用,为将来人工培养的兰坪虫草作为冬虫夏草代用品入药,提供理论依据和技术参考,同时也为临床上慢性肾衰竭的防治提供思路。本论文的研究内容包括以下两个方面:1.兰坪虫草水提物对小鼠慢性肾功能衰竭的治疗效果准备C57BL/6雄性小鼠70只,分为空白对照组(Normal组);模型组(腺嘌呤组);氯沙坦阳性对照组(Losartan组);兰坪虫草菌粉水取物低、中、高剂量组(OLEL、OLEM、OLEH组)和兰坪虫草菌粉组(OL组);共7组,每组10只。实验组小鼠灌胃腺嘌呤溶液造模(Adenine);Normal组小鼠灌胃等体积的蒸馏水。造模30天后,分别给阳性对照组灌服氯沙坦溶液(10 mg/kg/d);OLEL、OLEM、OLEH组灌服不同剂量的兰坪虫草菌粉水提物(0.5 g/kg/d、1.0 g/kg/d、2.0 g/kg/d)和OL组灌服兰坪虫草菌粉溶液(2.0 g/kg/d),空白对照组和模型组小鼠分别给予20 mL/kg/d蒸馏水。各组小鼠于造模成功后第7、14和28天称量小鼠体重,在给药后的第30天处死小鼠并摘眼球取血,分离血清,检测血清尿素氮、血肌酐、还原型谷胱甘肽、血磷含量、丙二醛、血浆钙含量和超氧化物歧化酶活力,同时取肾脏组织进行HE染色、Masson染色,观察肾组织病理变化。兰坪虫草菌粉及其水提物可提高小鼠体重、血清中还原型谷胱甘肽含量、SOD活力和血浆钙含量;同时可降低小鼠血清尿素氮、血肌酐、血磷和MDA含量。此外,兰坪虫草菌粉及其水提物可以显著改善慢性肾衰小鼠肾组织损伤及肾间质纤维化。高、中、低剂量的兰坪虫草菌粉水提物对小鼠慢性肾衰竭均有改善作用,其中高剂量组(2.0 g/kg/d)对小鼠慢性肾衰竭的改善作用最好,中剂量组(1.0 g/kg/d)与菌粉组(2.0 g/kg/d)的效果相当,而2.0 g兰坪虫草菌粉约可提取1.0 g兰坪虫草菌粉水提物。以上研究结果表明,兰坪虫草菌粉及其水提物对腺嘌呤诱导的小鼠慢性肾功能衰竭具有较好的改善作用,且兰坪虫草菌粉水提物中可能存在改善慢性肾衰的主要有效药用物质。2.兰坪虫草水提物对慢性肾衰竭小鼠的改善机制研究采用实时荧光定量PCR检测肾组织促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6以及MCP-1 mRNA的表达水平,以及免疫调节因子IL-10和TGF-β的mRNA表达水平。用蛋白免疫印迹(Western blot)的方法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl2、Caspase 3、Active-Caspase 3、Caspase 9蛋白表达量,以及炎症相关蛋白IL-6、P-65、P50的蛋白表达量,明确兰坪虫草菌粉水提物对肾组织相关蛋白表达量的影响。将肾组织制成石蜡切片,用TUNEL荧光染色法观察其细胞凋亡情况,再利用免疫组化法检测组织中巨噬细胞分布情况,观察其数量的变化。结果表明,兰坪虫草菌粉及其水提物可显著降低TNF-α、IL-1β、IL-6、TGF-β以及MCP-1 mRNA表达水平,提高了IL-10的mRNA表达水平。同时,兰坪虫草菌粉及其水提物可以降低Bax、Caspase 3、Active-Caspase 3、Caspase 9、P50、IL-6、P-65蛋白表达量,提高Bcl-2蛋白表达量。此外,研究证明兰坪虫草菌粉及其水提物可以缓解肾细胞凋亡,并可一定程度减少肾组织巨噬细胞数量。以上研究说明兰坪虫草菌粉及其水提物改善小鼠慢性肾衰竭的作用机制与炎症和细胞凋亡有关,并可以通过调控巨噬细胞数量,改善小鼠的免疫功能,最终达到改善慢性肾衰的效果。