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随着人类生活方式的改变,环境问题的突出,发病率和死亡率日趋增高的肿瘤已成为严重危害人类健康的疾病之一。除临床肿瘤治疗常用方法外,近年来,基础医学研究的迅速发展推动了靶向性抗肿瘤治疗方法和治疗药物的研发,并受到广泛关注。作为多梳蛋白复合物(Polycomb complex, PcG)的组分,含有锌指结构的Ringl和YY1结合蛋白(Ring1and YY1Binding Protein, RYBP)最初发现于小鼠的cDNA文库中,并证明广泛存在于包括人类、果蝇在内的多种动物中。研究证明,除参与个体发育,表观遗传调控外,RYBP对肿瘤的发生发展也有重要的作用。在多种癌组织中,如肝癌、宫颈癌等,都观察到RYBP蛋白的低表达；RYBP还能在胞质胞核中与多种凋亡调节蛋白相互作用,促进肿瘤细胞的凋亡；也有报道称,多种抗肿瘤药物可以诱导RYBP的表达,协同增强其诱导肿瘤细胞凋亡的能力。因此,我们希望通过对RYBP功能的深入研究,了解RYBP在肿瘤发生发展中的作用机制,为开发新的抗肿瘤药物夯实基础。在前期研究中发现RYBP可与MDM2相互作用,减少MDM2介导的p53蛋白的泛素化,稳定p53蛋白活性,抑制肿瘤发生；此外,我们还发现与正常的癌旁组织相比,RYBP在肝癌和肺癌组织中的表达明显降低。本论文第一部分工作是对慢病毒载体pWPI-IRES-EGFP进行改造,使其成为带有多个单克隆位点及标签蛋白序列的慢病毒载体pWPI-Linker。在此基础上构建了pWPI-RYBP,使用HKE293T细胞包装慢病毒颗粒,感染人结肠癌细胞株HCT116,表达的Flag-RYBP蛋白能够明显抑制HCT116细胞的增殖,抑制率为26.1±1.0%。此工作一方面为基于pWPI-Linker载体的各种重组蛋白的克隆、表达提供了便利,另一方面提高了RYBP载体及其蛋白分别对细胞的转染效率和在细胞中的表达水平,为今后研究RYBP蛋白提供了新的工具。本论文的第二部分工作是采用酵母双杂交系统筛选与RYBP相互作用的蛋白,发现RYBP能与FANK1(人类3型纤维连接蛋白和1型锚蛋白重复结构域蛋白,Fibronectin type3and Ankyrin Repeat Domains Protein1, FANK1)相互作用,并通过免疫共沉淀,GST pull-down,免疫荧光等方法证实了RYBP与FANK1在体内、体外的相互作用。进一步实验发现RYBP可以通过影响FANK1蛋白的降解途径稳定FANK1的表达,与RYBP目互作用后,FANK1激活AP-1信号通路的能力增强,且这种增强具有剂量依赖效应。在肿瘤细胞中的研究表明,与对照组相比,RYBP与FANK1相互作用后可以导致细胞周期阻滞,引起细胞凋亡,具体作用机制有待深入探讨。综上所述,本工作成功构建RYBP慢病毒表达载体,并首次发现RYBP与FANK1之间的相互作用,为深入研究RYBP蛋白,尤其是基于相互作用蛋白及肿瘤发生发展方面的功能奠定了基础。