第一部分 TRIF在RSV感染后期Ⅱ类因子产生及气道炎症和AHR中的作用　　背景及目的：呼吸道合胞病毒（RSV）是引起婴幼儿急性下呼吸道感染最常见的病毒病原;重症RSV感染是后期反复喘息甚至哮喘发生的独立危险因素。课题组前期研究发现RSV感染小鼠后期Th2类细胞因子（简称Ⅱ类因子）、气道炎症和气道高反应性（AHR）持续处于较高水平;TLRs-TRIF 通路介导了 RSV 感染急性期小鼠炎症因子和IFNs的产生;但RSV感染后期TRIF是否通过调节Ⅱ类因子的产生参与气道炎症和AHR的形成尚不清楚。本研究拟探讨TRIF在RSV感染后期对Ⅱ类因子产生、气道炎症和AHR的影响。　　方法：构建含有TRIF-shRNA的腺相关病毒（AAV）。6-8周龄雌性免疫抑制 BALB/c 小鼠;随机分为对照组、RSV 组、RSV+AAV-shRNA-TRIF组、RSV+AAV-control组。RSV感染前10天予AAV滴鼻;于RSV感染后第21天收集标本;冰冻切片荧光倒置显微镜观察 AAV-GFP 在小鼠肺部的表达情况;WB 检测肺组织中 TRIF的水平;ELISA检测BALF中IL-4、IL-5及IL-13的表达水平;Countstar 计数 BALF 中炎症细胞总数;瑞氏染色法行炎症细胞分类计数;肺组织病理切片H&E染色评价肺部炎症;全身体积描述记法检测小鼠AHR。　　结果：成功建立含TRIF-shRNA的AAV小鼠体内转染模型。RSV感染后期小鼠肺组织中TRIF持续高表达;予AAV干扰TRIF后;BALF中IL-4及IL-5均较RSV组及RSV+AAV-control组显著降低;但BALF中炎症细胞计数及肺组织病理评分无明显降低;而当吸入乙酰胆碱浓度为25mg/ml及50mg/ml时RSV+AAV-shRNA-TRIF组小鼠Penh值较RSV组及RSV+AAV-control显著下降。　　结论：TRIF 是Ⅱ类因子的产生途径之一;介导了 RSV 感染后期小鼠的AHR。　　第二部分 TRIF-IL-25对RSV感染后期Ⅱ类因子产生及气道炎症和AHR的影响　　背景及目的：TRIF 在 RSV 感染后期Ⅱ类因子的产生中有重要作用;但RSV感染如何通过TRIF触发了Ⅱ类反应尚不清楚。研究显示TSLP、IL-25 及 IL-33 等上皮源性细胞因子能有效始动Ⅱ类反应;且TSLP、IL-25及IL-33的释放与TLRs-TRIF信号通路的激活密切相关。本研究拟进一步探讨 RSV 感染后期 TRIF 是否通过 TSLP、IL-25 及IL-33调节Ⅱ类因子的产生;从而影响小鼠气道炎症和AHR。　　方法：检测RSV感染后不同时间点（第7天、14天、21天及28天）及AAV-shRNA-TRIF处理小鼠BALF中TSLP、IL-25及IL-33的表达情况。为探讨TSLP和IL-25在RSV感染后期Ⅱ类因子产生及气道炎症和AHR中的作用;进一步予anti-TSLP或anti-IL-25中和抗体处理小鼠;相应的RSV组给予阴性对照IgG同样处理。第21天收集标本;ELISA检测BALF中TSLP、IL-25、IL-33、IL-4、IL-5及IL-13的表达水平;Countstar计数各组小鼠BALF中细胞总数;瑞氏染色法行炎症细胞分类计数;苏木精-伊红（H&E）染色观察肺部病理损伤;全身体积描述记法检测小鼠AHR。　　结果：（1）RSV感染后BALF中TSLP在第14天开始升高;第21天具有显著性差异;IL-25和IL-33的水平在第14天显著升高;第21天达到高峰;（2）予AAV干扰TRIF后;BALF中TSLP及IL-25均较RSV组及RSV+AAV-control组显著降低;IL-33仅有降低趋势;（3）予anti-TSLP中和抗体处理小鼠后;BALF中IL-4、IL-5、IL-13无明显降低;BALF中炎症细胞浸润程度及AHR无明显减轻;（4）予anti-IL-25中和抗体处理后;BALF中IL-25、TSLP、IL-33和IL-5较RSV组均显著降低;IL-4 和 IL-13 有降低趋势;BALF 中炎症细胞浸润总数较RSV 组明显降低;分类计数以巨噬细胞下降最为明显;肺组织病理损伤明显减轻;AHR有下降趋势。　　结论：TRIF参与了RSV感染后期TSLP及 IL-25的产生;IL-25可能通过巨噬细胞介导了RSV感染后期的Ⅱ类反应。