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目的:(1)从流行病学角度探讨影响阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)患者患病的相关因素以促进AD的预防;(2)运用定量蛋白质组学技术探索AD患者血浆神经源性外泌体蛋白质表达谱的变化,以寻找相关生物标志物促进AD的早期诊断。方法:(1)随机选取深圳市某区某医院137例经过简易智力状态评估量表(Mini-Cog)和简明精神状态量表(Mini-mental State Exami nation,MMSE)评估的60岁及以上认知功能障碍老年人作为病例组,并选取同区域137例性别相同、年龄±3岁的健康老人作为对照组,以建立1:1匹配的病例对照研究。采用经专家审查的调查问卷调查研究对象的日常饮食情况,并采集他们的血糖、血脂及血压等临床资料,利用Epidata3.1软件录入上述数据,并运用SPSS19.0软件进行单因素分析、logistic回归及相关性分析等统计学分析。(2)从上述137对样本中选取确诊的AD患者、轻度认知障碍(Mild Cognitive Im pairment,MCI)患者及80、60、40岁正常人各6例共5组研究对象,每组男女比例均为1:1,且AD、MCI及80岁组年龄差异无统计学意义(P>0.05)。(3)采用ExoQuick提取人血浆中的外泌体,用L1细胞粘附分子(L1 Cell Adhesion Molecule,L1CAM)生物素化抗体分离出神经源性的外泌体。通过透射电子显微镜、Nanosight NS500和Nanoparticle Tracking Analysis(NTA)软件及ELISA鉴定外泌体,将裂解获得的外泌体蛋白经烷基化、脱盐及酶解等步骤降解为肽段,并采用Tandem Mass Tag(TMT)进行标记,利用LC-ESI-MS/MS对标记肽段进行鉴定及相对定量。(4)运用Perseus软件分析出组间差异具有统计学意义的外泌体蛋白,并运用GO(Gene Ontology)注释、韦恩图(Venn)、火山图(Volcano Plot)、热图(Heatmap)、Kyo to Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)、Wikipathway以及STRING蛋白质互作网络等生物信息学方法对上述差异蛋白进行分析。结果:(1)病例组的年收入、教育程度、每月蔬菜、淡水贝/虾和鸡蛋摄入量以及绿茶饮用频率等6个因素与对照组相比差异具有统计学意义。多因素条件logistic回归分析表明,教育程度高(OR=0.651,95%CI:0.476,0.890)是认知功能障碍的保护因素;蔬菜摄入多(OR=2.405,95%CI:1.568,3.688)及淡水贝摄入多(OR=3.796,95%CI:1.258,11.453)是认知功能障碍的危险因素。(2)相关性分析等统计分析结果表明病例组血糖值高于对照组,且糖尿病患病率高于对照组;患者的Mini-Cog分数越小,则其MMSE分数越小,鸡蛋摄入量越少,淡水贝/虾及蔬菜的摄入量越多,体质指数(Body Mass Ind ex,BMI)值越大,血糖值越高;患者的MMSE分数越高,海鱼和奶制品摄入量越多,收缩压和血糖值越低。(3)电镜、NTA分析及ELIS A结果表明本研究成功分离到双层膜结构的外泌体。LC-ESI-MS/MS共鉴定出360个蛋白,运用Perseus进行方差分析,结果表明5组之间比较有62个差异蛋白(P<0.05);进一步进行两两组间比较的t检验分析发现AD与MCI,AD与80,MCI与80,80与60,80与40,60与40,AD与60,AD与40,MCI与60及MCI与40组之间分别有8、15、18、41、42、57、41、40、30以及36个差异蛋白(P<0.05),按照表达差异Ratio>1.5或Ratio<0.67的标准,各组间上调的蛋白分别有4、6、9、19、31、37、41、40、30以及36个,下调的蛋白分别有4、9、9、22、11、19、28、17、21以及14个。生物信息学分析结果发现62个差异蛋白参与了42类生物过程(Biological Process,BP)、18类分子功能(Molecular Function,MF)及16类细胞组成(Cellular Component,CC),BP中排名前7的主要是内吞作用、补体激活、内肽酶活性的调节以及参与吞噬作用的Fc-γ受体信号传导途径等;MF中排名前7的主要是丝氨酸型内肽酶活性、内肽酶抑制剂活性、抗原结合、钙离子结合以及MHC II类蛋白质复合物结合等;CC结果表明有43个差异蛋白属于外泌体蛋白。信号通路分析结果表明62个蛋白主要参与补体和凝集系统、他汀途径、脂质颗粒的组成、氧化损伤、硒微量营养素网络以及PI3K-Akt等10条信号通路。STRING结果表明13个外泌体蛋白:A2M,LCAT,FER MT3,HSP90AB1,APOC1,FCN2,ADIPOQ,ATPB,SPP2,HSP90AA1,FBLN5,PIGR以及COMP与其他蛋白存在相互作用。结论:(1)教育程度高是认知功能障碍的保护因素;蔬菜摄入多及淡水贝摄入多是认知功能障碍的危险因素。应提倡适当增加海产品、奶制品及鸡蛋的摄入量,适当饮用绿茶,保持适当的BMI。(2)免疫沉淀法可被用来获取外周血中神经源性外泌体,AD及MCI患者该类外泌体的蛋白质表达谱发生了改变,有望通过这些差异蛋白促进AD的早期诊断和治疗。