研究背景：绝大多数的人类体细胞均无端粒酶活性，但是几乎所有的恶性肿瘤显示异常活跃的端粒酶活性。端粒酶可以使肿瘤细胞维持端粒长度，保持无限度的复制能力。虽然不能完全肯定端粒酶能够诱导肿瘤发生，但它至少是肿瘤无限生长的必需物质。目前大多数肿瘤均能检测到端粒酶活性，如前列腺癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、膀胱癌、子宫内膜癌、卵巢癌胰腺癌以及淋巴瘤、白血病、黑色素瘤。此外在一些肿瘤中端粒酶水平与患者的预后相关，如成神经细胞瘤、白血病、前列腺癌、胃癌和乳腺癌。间接体内实验表明人端粒酶RNA反义序列可以阻断肿瘤细胞系的生长。在这些实验中通过抑制端粒酶可导致端粒缩短，肿瘤细胞死亡，提示端粒酶可以作为肿瘤基因治疗的靶点。端粒酶在正常细胞及肿瘤细胞中的不同表达，预示端粒酶抑制剂作为新兴抗肿瘤药物具有低毒和高效的特点。 目的：研究探讨病毒载体介导端粒酶催化亚基反义基因治疗卵巢癌的可行性。 方法：本文第一部分应用基因克隆技术，首先构建并鉴定了含反向hTERTcDNA重组质粒；第二部分将重组载体导入人卵巢透明细胞癌细胞系ES-2，观察转染前后细胞生长及增殖状况和端粒酶活性；第三部分以逆转录病毒为载体，以PT67细胞系包装携带目的基因的逆转录病毒，将目的基因导入宿主，观察实验动物体内肿瘤的生长情况及该治疗的毒性作用。 结果：成功构建和鉴定了含反义hTERTcDNA重组复制缺陷型病毒载体，以该载体转染卵巢癌细胞系可以抑制细胞生长，下调hTERT表达，降低端粒酶活性。体内实验显示，荷瘤裸鼠注射含反义hTERTcDNA的复制缺陷型病毒后，瘤体积减小，腹水减少，生存期延长。 结论：1．反向hTERTcDNA序列可以明显抑制体外培养的卵巢癌细胞系ES-2的生长、增殖和代谢能力，下调细胞hTERTmRNA的表达，抑制端粒酶的活性，部分逆转其恶性表型。2．构建了国内第一个裸鼠卵巢癌腹水瘤模型，成瘤率100％，裸鼠出现腹部膨大的时间与接种SK-OV-3的细胞数呈现 天津医科大学博士论文相关性，即接种SK一O从3的细胞数越多，裸鼠出现腹部膨大所需的时间越短，3.复制缺陷型逆转录病毒pLXSN一AS一hTERTRv治疗能明显抑制裸鼠皮下瘤及腹水的生长，虽然有一定的毒性作用，但是通过优化治疗方案能够降低毒，胜。