【摘 要】
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目的:构建过表达和沉默Idl基因的慢病毒载体,以兔椎间盘髓核细胞为研究对象,观察经BMP一2诱导后的髓核细胞内Idl基因的表达水平调整以后细胞分泌软骨特性因子的变化,研究Idl在
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目的:构建过表达和沉默Idl基因的慢病毒载体,以兔椎间盘髓核细胞为研究对象,观察经BMP一2诱导后的髓核细胞内Idl基因的表达水平调整以后细胞分泌软骨特性因子的变化,研究Idl在BMPs维持椎间盘细胞软骨表型中的作用。方法:(1)设计针对Id1基因过表达和RNA干扰(RNAi)的序列,应用基因重组技术将目的基因片段连接到慢病毒载体,然后感染293T细胞之后进行测序鉴定与病毒滴度检测;(2)以两种慢病毒分别感染兔髓核细胞,QRT-PCR和Western blot检测髓核细胞Id1 mRNA和蛋白质的表达;(3)重组腺病毒AdBMP2感染髓核细胞后,利用已制备的两种慢病毒再次感染细胞,QRT-PCR、ELISA检测细胞表达软骨特性分子的能力与变化趋势。结果:(1)成功构建Id1基因过表达与RNAi漫病毒载体,测序结果与Id1基因序列比对后确认一致。(2)慢病毒感染髓核细胞后,Id1基因的mRNA与蛋白的表达量与正常细胞组及空载病毒感染组比,过表达组增加,RNAi组下降,符合预期结果。(3)细胞内Idl的表达增加可促进软骨特性因子col Ⅱ(0.407±0.083)和ACAN(0.284±0.074)的mRNA表达。(4)AdBMP2处理细胞后,Id1基因表达增加可使col II(0.590±0.072)和ACAN(0.351±0.066)的mRNA表达进一步显著升高;Idl表达降低时,以上因子的表达被明显抑制(col II:0.244±0.060,ACAN:0.168±0.034).结论:Idl能够促进兔椎间盘髓核细胞软骨特性分子的表达,细胞内Idl基因水平变化能够显著影响BMP-2诱导细胞分泌软骨特性因子。Idl是BMP-2维持兔髓核细胞软骨特性作用的关键因子。
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