子宫内膜癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，术后的局部复发及远处转移是影响患者生存率的重要因素。近年来越来越多的研究表明，上皮间质转化在肿瘤的原位侵袭及远处转移中扮演了重要的角色，这种转化由多种生长因子调控，可经多个信号传导途径，最终活化转录调节因子促进EMT 发生。转化同时伴随细胞上皮标志物如：　　 钙粘蛋白、连环蛋白α的表达量减少；细胞间质标志物如：神经钙粘蛋白、波形蛋白的表达量升高。　　 另有研究表明，EGFR过表达可介导子宫内膜癌细胞内MAPK信号通路的异常活化，降低其对孕激素的敏感性使其产生耐药，并增强侵袭能力导致患者预后不良，这些现象是否是因为EGFR过表达引起上皮间质转化导致的，尚无相关报道。本研究拟采用质粒转染技术，对子宫内膜癌Ishikawa细胞株进行EGFR过表达处理，检测上皮标志物及间质标志物在过表达前后的变化情况，探讨EGFR过表达对子宫内膜癌细胞上皮间质转化的影响。　　 本课题共分四个部分：(1)EGFR、E-cadherin、α-catenin、N-cadherin、Vimentin在不同的子宫内膜癌细胞株中的表达；(2)E-cadherin、α-catenin、N-cadherin、Vimentin在不同分期分级的子宫内膜癌组织中的表达；(3)稳定过表达EGFR 的子宫内膜癌细胞株的建立及形态学改变；(4) 过表达EGFR 使子宫内膜癌细胞株发生上皮间质转化。第一部分 EGFR、E-cadherin、α-catenin、N-cadherin、Vimentin 在不同的子宫内膜癌细胞株中的表达　　 目的：检测EGFR、E-cadherin、α-catenin、N-cadherin 、Vimentin 在不同的子宫内膜癌细胞株中表达量是否存在差异。本研究同时选取高分化、低侵袭性的Ishikawa 细胞株及低分化、高侵袭性的KLE 细胞株，探讨侵袭能力是否与上皮间质转化有关系。　　 方法：应用实时荧光定量PCR、Western blot 检测EGFR、E-cadherin、α-catenin、N-cadherin 、Vimentin 在两种细胞株中mRNA 及蛋白的表达量，并比较表达差异。　　 结果： (1)EGFR 高表达的KLE 细胞株侵袭能力强。(2)上皮标志物在EGFR 低表达的Ishikawa 细胞株中表达量高，在EGFR 高表达的KLE 细胞株中表达量低。间质标志物表达量则相反。(P <0.01)结论侵袭能力强的细胞株EGFR 呈高表达，且与EMT 发生有关。　　 第二部分 E-cadherin、α-catenin、N-cadherin、Vimentin在不同分期及分级的子宫内膜癌组织中的表达　　 目的：检测E-cadherin、α-catenin、N-cadherin 、Vimentin 在不同分期分级的子宫内膜癌细胞组织中表达量是否存在差异。　　 方法：应用免疫组化检测E-cadherin、α-catenin、N-cadherin 、Vimentin 在不同分期分级的子宫内膜癌组织中的表达量，并比较表达差异。　　 结果：随着子宫内膜癌组织分期分级的递增，上皮标志物表达量升高，间质标志物表达量降低 (P <0.01)。结论 EMT 发生与子宫内膜癌临床分期病理分级相关联。　　 第三部分过表达EGFR 子宫内膜癌细胞株的建立及其形态学改变　　 目的：建立过表达EGFR 的子宫内膜癌细胞株，观察其形态学的改变。　　 方法：应用DNA 转染技术将重组质粒转染Ishikawa 细胞，G418 长期筛选，建立稳定过表达EGFR 的Ishikawa 细胞株。采用实时荧光定量PCR、Western blot 检测转染效果，并观察转染后细胞株的形态学改变。　　 结果：子宫内膜癌Ishikawa细胞有上皮细胞形态特点，呈圆形、椭圆形、多角形等多种形态，细胞间联系紧密。质粒转染后的Ishikawa细胞极性丧失，呈现梭形、纺锤样细胞形态，细胞间隙增宽，说明细胞粘附性下降，部分可从细胞膜伸出伪足，运动能力增强。　　 结论：应用脂质体转染技术能够使EGFR 在Ishikawa 细胞中过表达，建立稳定过表达EGFR 的Ishikawa 细胞株。　　 第四部分过表达EGFR 使子宫内膜癌细胞株发生上皮间质转化目的探讨过表达EGFR 的Ishikawa 细胞是否发生上皮间质转化。　　 方法应用实时定量PCR 及Western blot 技术检测转染后Ishikawa 细胞的E-cadherin、α-catenin、N-cadherin 、Vimentin mRNA 及蛋白的表达量。　　 结果过表达EGFR后Ishikawa细胞株上皮标志物的表达量降低，间质标志物的表达量升高(P<0.01)。结论过表达EGFR 的Ishikawa 细胞株发生上皮间质转化。