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展青霉素主要是由青霉属、曲霉属、丝衣霉属等霉菌代谢产生的一种有毒的真菌次级代谢产物,是一种遗传毒性化合物,具有致畸性、致癌性和免疫毒性。展青霉素对水果及水果制品的污染在全球范围内都比较严重,尤其是在苹果及其制品中。现有的展青霉素清除方法如清洗和拣选原料、吸附处理、澄清处理等虽然能有效地降低展青霉素的浓度,但这些方法并不能真正使展青霉素得到降解,展青霉素进入清洗用水或者富集到吸附材料及澄清后的固态沉淀中,清洗水、吸附材料、澄清后沉淀以及拣选出的腐烂苹果中的展青霉素对环境存在很大的潜在威胁。而且这些方法的效果都很有限,很难将水果及其制品中的展青霉素降低到安全限度内。另外,现有展青霉素降解方法如辐照、臭氧氧化及添加化学物质处理等,或由于成本昂贵或由于安全性尚未明确,多停留在试验阶段,生产中尚未见有实际应用。
酵母菌具有遗传稳定,抑菌谱广、效价高,一般不产生对人和寄主植物有害的代谢产物,安全性高,且对营养要求低,生长快,并对多种胁迫、逆境具有较强的耐受力,对大多数杀菌剂不敏感,对其它化学和物理处理能够相容的特点。近年来国际上广泛关注拮抗酵母作为水果采后病害生防菌,并且一些拮抗酵母不仅能直接抑制苹果上的扩展青霉,防止扩展青霉产生展青霉素,而且还能分解已经存在的展青霉素。
本论文采用实验室已经筛选分离并鉴定的卡利比克毕赤酵母(Pichiacaribbica)为研究对象,研究了P.caribbica对苹果采后青霉病的防治效力及对果实自然腐烂率及贮藏品质的影响,探讨了P.caribbica抑制苹果采后青霉病的各种可能的生理机制及P.caribbica体外降解展青霉素的机制。主要研究结果如下:
1.使用各种浓度的P.caribbica处理苹果,都能有效控制由Penicilliumexpansum引起的青霉的发病率,减少苹果采后腐烂损失,并且随着酵母浓度的增高发病率逐渐降低。P.caribbica对苹果自然状况下病害的发生也有显著的抑制作用,并且不会对果实的贮藏品质造成不良影响。
2.P.caribbica抑制苹果采后青霉病的生理机制包括以下几方面:P.caribbica能迅速在苹果果实伤口处生长繁殖,与病原菌进行营养和空间的竞争;在体外试验中P.caribbica能显著抑制致病菌P.expansum孢子萌发及菌丝体的生长;P.caribbica还能显著诱导苹果果实的多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)及几丁质酶等抗性酶的活性,从而延缓果实衰老,提高果实自身的抗病能力。
3.通过体外试验,探讨了P.caribbica降解展青霉素的机制探讨,发现降解展青霉素需要酵母活体细胞,在展青霉素存在情况下诱导酵母分泌的胞外酶具有降解作用。
4.通过蛋白质组学技术,对P.caribbica降解展青霉素24h和36h后酵母细胞蛋白进行了分离、比较和鉴定,结果显示,P.caribbica降解展青霉素过程中,酵母细胞中少数与抗性相关的蛋白及多种基础代谢蛋白被诱导或抑制。