禽流行性感冒病毒( Avian Influenza virus , AIV )属正粘病毒科(Orthomyxoviridae family)、流感病毒属。是由A型流感病毒引起的禽类的一种急性高度接触性传染病,国际动物卫生组织已将其列为A类动物传染病。根据病毒表面糖蛋白HA和NA的抗原性差异可以分为16个HA亚型和9个NA亚型。由于AIV亚型众多,研制开发亚型特异灵敏的诊断试剂以及安全有效的疫苗,成为当前我国禽流感综合防制的一项主要任务。血凝素(HA)是流感病毒的主要表面糖蛋白,HA具有产生中和抗体的能力,可产生免疫保护作用,因此血凝素在禽流感的诊断和防制中起重要作用。本实验利用PCR反应,以特异性引物扩增去除信号肽的禽流感病毒H7亚型HA鸡密码子偏嗜性优化基因,然后克隆到pMD-18T载体中,经测序鉴定后,筛选到阳性重组子optiH7HA-pMD18-T质粒,用限制性内切酶HindⅢ和BamHⅠ消化重组的optiH7HA-pMD18-T质粒,将HA基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBac-HTB中,转座DH10Bac感受态细胞,通过蓝白筛选、PCR鉴定获得阳性克隆,然后提取重组Bacmid,转染Sf9昆虫细胞,得到含H7亚型流感病毒HA基因的重组杆状病毒optiH7HA-rBac。重组杆状病毒接种Sf9昆虫细胞,待绝大部分细胞产生细胞病变后收获细胞,细胞裂解产物经血凝试验、SDS-PAGE、Western-Blot及间接免疫荧光分析证实,密码子优化的H7HA基因在重组杆状病毒optiH7HA-rBac感染Sf9细胞后获得高效表达,且具有良好的蛋白活性及特异免疫反应原性。因此,杆状病毒高效表达的HA蛋白在禽流感病毒诊断及新型亚单位疫苗研究方面具有发展前景。