Sox9基因转染骨髓干细胞修复退变椎间盘的研究

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目的:1.探讨T2mapping技术作为一种灵敏、无创的工具定量评估椎间盘退变的潜力和可行性。2.研究腺病毒介导的Sox9基因转染对单层培养骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化的作用。3.研究Sox9基因转染的BMSCs在三维壳聚糖水凝胶(C/Gp)中的分化情况。4.通过体内动物实验,探讨Sox9基因转染自体BMSCs-C/Gp复合物对退变椎间盘的修复作用。方法:1.建立兔椎间盘退变模型,通过传统MRI、T2mapping和real-timePCR检测,观察髓核横向弛豫时间(T2)和蛋白聚糖、II型胶原基因表达在退变过程中的纵向变化,研究其相关性。2.分离、培养兔BMSCs,将携有Sox9基因的腺病毒导入BMSCs,利用real-time PCR法检测Sox9基因转染的单层培养BMSCs的相关基因表达。3.制备温敏性壳聚糖水凝胶C/Gp,将BMSCs与C/Gp复合,通过死活细胞染色和MTT法检测BMSCs的存活和增殖情况,观察Sox9基因转染对三维C/Gp培养BMSCs相关基因表达的影响。4.制作兔椎间盘退变模型,从影像学、大体形态学、组织学以及免疫组织化学等方面观察Sox9-BMSCs-C/Gp复合物修复退变椎间盘的作用。结果:1.髓核T2与改良Thompson分级间呈明显负相关。髓核T2值与蛋白聚糖、II型胶原的基因表达在诱导椎间盘退变后的前3周降低最明显。髓核T2与蛋白聚糖、II型胶原基因表达在整个退变进程中呈强相关。2. Sox9转染并未影响BMSCs增殖,转染Sox9基因的BMSCs高表达Sox9蛋白,Sox9、II型胶原和蛋白聚糖的基因表达明显上调。3. C/Gp在室温下呈液态,37℃时呈凝胶状。BMSCs可在C/Gp中存活、增殖。转染Sox9基因的BMSCs在C/Gp中高表达Sox9、II型胶原和蛋白聚糖基因。4. Sox9基因转染的BMSCs可在体内存活12周,Sox9-BMSCs组椎间盘在影像学、大体形态学、组织学及免疫组织化学几方面均表现出更少的退变性变化。结论:1.髓核T2与蛋白聚糖、II型胶原基因表达有较好的相关性。T2mapping可以作为一种灵敏的无创的工具定量评估椎间盘退变。2. Sox9基因转染可以诱导单层培养BMSCs向髓核样细胞分化。3. C/Gp具有较好的细胞相容性,转染Sox9基因的BMSCs在三维C/Gp中可以向髓核样细胞分化。4. Sox9基因转染BMSCs-C/Gp复合物可以有效延缓椎间盘退变。
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