应用消减杂交技术研究非小细胞肺癌基因表达谱的变化和TIG2基因生物学功能的研究

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  随着人类基因组测序的逐步完成,功能基因组的研究成为今后的主要研究方向之一。本文采用消减杂交技术筛选与肺癌发生、发展相关的功能基因,通过临床病人肺癌组织与其癌旁正常组织基因表达谱的变化,构建差异表达的cDNA文库,经测序和RT-PCR验证,筛选出与肺癌有重要贡献的一组基因。本文从中选择TIG2基因深入研究其对肺癌发生、发展的作用。   从正常肺细胞WI-38中克隆TIG2cDNA,通过体外构建哺乳动物表达重组质粒(pFLAG-CMV/TIG2;pCI-neo/TIG2),然后分别转染肺癌细胞(A2,LH7),免疫荧光揭示TIG2编码蛋白主要定位于细胞质内,且分泌出去。培养的肺癌细胞(A2,LH7,BE1)经维甲酸不同浓度处理,发现TIG2基因仍表达沉默,因此,肺癌细胞(A2,LH7,BE1)是维甲酸无应答细胞;然后经去甲基化试剂(5-Aza-CdR)处理后,发现TIG2基因获得重新表达,因此,推断TIG2基因在肺癌细胞中表达沉默与DNA甲基化有关,经CpG岛软件预测,发现TIG2基因调控区存在CpG岛,文献报道,在肺癌细胞中,维甲酸受体β(RARβ)常出现甲基化,抑制其表达,所以,TIG2基因的表达沉默可能与RARβ和/或TIG2甲基化有关。综合以上实验结果初步表明,TIG2基因的表达影响肺癌的发生、发展,并且可能作为一新的肿瘤抑癌基因。
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