论文部分内容阅读
第一部分SGTB在骨关节炎组织中的表达分析目的:构建大鼠骨关节炎模型(关节不稳模型,切断前交叉韧带),探讨SGTB在骨关节炎中的表达变化情况。方法:通过取骨关节炎大鼠膝关节,番红O固绿染色检测关节软骨基质中粘多糖的含量,反应骨关节炎的病理情况,通过骨关节炎评分检测大鼠关节炎疾病严重程度,免疫组化检测组织中SGTB的表达水平,RT-PCR检测组织中SGTB mRNA水平,分析SGTB在骨关节炎的中表达变化。结果:大鼠骨关节炎模型中,番红O固绿染色及骨关节炎OARSI评分验证了模型建立成功,SGTB在蛋白质及mRNA水平都随着骨关节炎模型的成功建立,其表达也明显升高。结论:SGTB在大鼠骨关节炎中的表达升高,提示SGTB参与了骨关节炎的炎症发生发展。第二部分SGTB调节Caspase-3介导的细胞凋亡的分析目的:在IL-1β刺激的SW1353软骨细胞中,分析SGTB与Caspase-3两者之间的调控关系。方法:不同时间的IL-1β刺激的SW1353细胞中,蛋白印迹检测SGTB及Caspase-3表达水平的变化,细胞免疫荧光检测SGTB与Caspase-3在SW1353软骨细胞中的表达及共定位情况,运用SGTB干扰siRNA抑制细胞中SGTB的表达,以及运用SGTB过表达质粒促进SGTB的表达,通过蛋白印迹实验分别检测干预SGTB对Caspase-3活化的影响,分析两者在炎症中的相关性。结果:SGTB和Caspase-3随着IL-1β刺激的时间增加而升高,分别在36小时和24小时达到高峰。抑制SGTB的表达,Caspase-3的活化也随之减少,而过表达SGTB,增加了Caspase-3的活化。在IL-1β刺激后,SGTB与caspase-3在SW1353细胞中各自荧光强度增加,并且两者在细胞中的共定位增加。结论:在IL-1β刺激的SW1353软骨细胞中,SGTB可以促进Caspase-3的活化,从而促进Caspase-3介导的软骨细胞的凋亡。第三部分SGTB通过HSP70调节软骨细胞凋亡的研究为了探讨SGTB调节软骨细胞凋亡可能的分子机制,在IL-1β刺激的SW1353软骨细胞中,分析SGTB对HSP-70表达的影响及其与细胞凋亡数之间的关系。方法:IL-1β刺激的SW1353软骨细胞后,运用SGTB干扰si RNA抑制细胞中SGTB的表达,以及运用SGTB过表达质粒促进SGTB的表达,运用流式细胞计数检测SGTB对细胞凋亡的影响。不同时间点蛋白印迹检测IL-1β刺激后HSP-70表达水平的变化,通过蛋白印迹分别检测干预过表达SGTB对HSP-70表达的影响。结果:HSP-70随着IL-1β刺激的时间增加而升高,并且在6小时达到高峰,而过表达SGTB,可减少IL-1β刺激后软骨细胞HSP-70的表达。流式细胞计数:在抑制SGTB表达的细胞中,细胞凋亡减少,而过表达SGTB的细胞中,细胞凋亡增加。结论:在IL-1β刺激的SW1353软骨细胞中,SGTB可以抑制HSP-70的表达,促进Caspase-3介导的软骨细胞的凋亡。