【摘 要】
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目的明确PCL提取物(FPL和BPL)激活Nrf2/ARE信号通路,对CCl_4诱导BRL损伤的保护作用,揭示PCL提取物体外肝损伤保护作用的抗氧化机制。方法将BRL分为正常组、CCl_4损伤组、PCL处理组(FPL和BPL提取物处理)和PCL干预组(经FPL和BPL预处理后+CCl_4损伤)。细胞中氧化损伤指标包括ROS、Cyt C和8-OHd G的水平采用酶联免疫试剂盒进行检测;细胞中Nrf2
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目的明确PCL提取物（FPL和BPL）激活Nrf2/ARE信号通路,对CCl4诱导BRL损伤的保护作用,揭示PCL提取物体外肝损伤保护作用的抗氧化机制。方法将BRL分为正常组、CCl4损伤组、PCL处理组（FPL和BPL提取物处理）和PCL干预组（经FPL和BPL预处理后+CCl4损伤）。细胞中氧化损伤指标包括ROS、Cyt C和8-OHd G的水平采用酶联免疫试剂盒进行检测;细胞中Nrf2和Keap1、Ⅱ相解毒酶NQO1和HO-1以及抗氧化酶GSR和SOD的mRNA基因表达水平采用荧光免疫法进行测定;同时,细胞中Nrf2和Keap1以及二相解毒酶NQO1、HO-1和GCLC蛋白表达量采用Western blot进行检测;另外,细胞核和胞浆内Nrf2和Keap1的表达量以及胞内p38、JNK和ERK及其磷酸化形式蛋白表达量采用Western blot进行测定。结果FPL和BPL提取物能降低CCl4损伤引起的BRL中的CytC、ROS、和8-OHd G水平的增加。相较于正常组,CCl4损伤并未增加细胞中Nrf2和Keap1、Ⅱ相解毒酶NQO1和HO-1以及抗氧化酶GSR和SOD的mRNA表达量;但增加Nrf2蛋白表达量,减少下游蛋白表达量。另外,FPL和BPL处理未改变细胞中Nrf2基因mRNA的表达量,但是增加了Keap1基因的mRNA表达量,其中1.6 mg/m L FPL和BPL处理组分别比正常组增加了352%和235%;并且增加了细胞中Ⅱ相解毒酶NQO1和HO-1以及抗氧化酶GSR和SOD的mRNA表达量,其中1.6 mg/m L FPL和BPL处理组NQO1、HO-1基因的mRNA表达量分别比正常组增加了10.03和67.38倍及9.0和2.35倍,GSR和SOD的mRNA表达量分别比正常组增加了8.69倍、6.1倍和6.02倍、5.95倍;不同浓度FPL和BPL处理组对Nrf2蛋白表达量的影响存在差异。就FPL和BPL干预组而言,上调了Nrf2和Keap1基因的表达,其中1.6 mg/m L剂量组Nrf2和Keap1基因的mRNA表达量分别比损伤组增加了5.85和4.18倍,及146.48和110.84倍;同时,增加了细胞中Ⅱ相解毒酶NQO1和HO-1以及抗氧化酶GSR和SOD的mRNA表达量。0.4和0.8 mg/m L FPL和BPL干预组增加了Nrf2蛋白表达量;FPL和BPL干预组中,Keap1、GCLC、HO-1和NQO1蛋白表达量存在差异。相较于损伤组,PCL干预组细胞中p38、JNK蛋白磷酸化程度均下降,而ERK蛋白磷酸化程度呈上升趋势。结论在测试浓度范围内,FPL处理未能激活Nrf2信号通路,但可增加下游Ⅱ相解毒酶（HO-1和NQO1）的基因和蛋白表达量,以及抗氧化酶（SOD和GSR）的基因水平;BPL处理可以激活Nrf2信号通路,增加下游Ⅱ相解毒酶（HO-1和NQO1）的基因和蛋白表达量,以及抗氧化酶（SOD和GSR）的基因水平。另外,FPL和BPL干预可有效降低CCl4对BRL的损伤作用。其通过激活Nrf2/ARE信号传导通路,引起下游解毒酶的响应作用,从而让肝细胞免受氧化应激损伤,发挥对BRL的保护作用。
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