猪MKK6、AKT2基因的克隆、SNP检测及与生产性状的关联分析

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传统的育种与分子育种相结合已经成为现在家畜育种的主要方法之一。寻找与重要经济性状相关的主效基因和分子标记是进行分子育种的基础。根据肌肉发育调控网络,生理生化知识,和人、鼠等生物种已经取得的研究结果,选取了MKK6和AKT2基因作为影响猪肌肉品质性状的候选基因。利用比较基因组和电子克隆的方法,分离鉴定了猪MKK6和AKT2基因。利用半定量RT-PCR方法对目的基因进行了组织表达谱的研究;利用直接测序法对所分离的片段进行多态性分析;并在大梅F2资源家系中进行了性状关联分析。研究结果如下:1.MKK6基因(1)获得了猪MKK6基因获得了包括CDS在内1516bp的cDNA序列。ORF为1005bp,编码334个氨基酸。与人91%同源与小鼠90%同源。获得了第3、8内含子序列。(2)对所获得的序列进行了多态性检测,建立了MKK6基因第8内含子667bp处的PCR-FspBI-RFLP分型技术。(3)遗传标记与重要经济性状的关联分析结果表明该位点的不同基因型组合间的肥肉率、瘦肉率、瘦肥肉比例、眼肌面积存在显著差异。AA基因型的肥肉率显著高于AB基因型(p<0.05)。AA基因型的瘦肉率极显著低于BB基因型(p<0.01)。AA基因型的瘦肥肉比例显著低于BB基因型(p<0.05)。AA基因型的眼肌面积显著低于BB基因型(p<0.05)。(4)通过半定量RT-PCR的方法分析了MKK6基因在四月龄梅山的肝脏、子宫、卵巢、肺、胃、心、小肠、肾脏、脂肪、脾、肌肉等十一个组织中的表达情况。MKK6基因在肌肉中表达量最高,在心脏和肾中也有表达,在其余组织中均不表达。2.AKT2基因(1)获得了猪AKT2基因获得了包括CDS在内1589bp的cDNA序列。ORF为1344bp,编码447个氨基酸,CDS序列与人93%同源,与鼠92%同源。获得了第5、7内含子序列。(2)对所获得的序列进行了多态性检测,建立了AKT2基因第10内含子348bp处的PCR-SacI-RFLP分型技术。(3)遗传标记与重要经济性状的关联分析结果表明位点的不同基因型组合间的肩部最厚处膘厚,肌肉PH值(BF),系水率(LD),水分(LD)存在显著差异。AA基因型肩部最厚处膘厚显著低于BB基因型(p<0.05)。AB基因型的肌肉PH值(BF)显著高于BB基因型(p<0.05)。AA基因型的系水率(LD)显著高于AB基因型(p<0.05)。AB基因型的水分(LD)显著高于BB基因型(p<0.05)。(4)通过半定量RT-PCR的方法分析了AKT2基因在四月龄梅山的肝脏、子宫、卵巢、肺、胃、心、小肠、肾脏、脂肪、脾、肌肉等十一个组织中的表达情况。AKT2基因在肌肉、子宫、心脏中表达量最高,在肝和肾中也有表达,在其余组织中均不表达。
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