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目的:研究神经轴突导向分子Semaphorin 5A(Sema 5A)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)中的表达特征,了解Sema 5A诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞向破骨细胞分化的作用。方法:1.应用ELISA方法检测62例RA患者与48例健康对照组血清中Sema 5A的浓度,分析其与RA患者疾病活动度、骨破坏程度及各实验室指标的关系;2.以不同浓度 Sema 5A(0,0.5,1,2.5,5μg/ml)处理 RAW264.7 细胞,RANKL及PBS为对照组,培养7天后进行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色,100倍镜下观察TRAP阳性细胞数量,并计数;3.采用Real-time PCR法检测RAW264.7细胞中TRAP,组织蛋白酶(cathepsin-K,CTSK)和金属基质蛋白酶(matrixmetalloproteinases-9,MMP-9)的mRNA表达水平;4.以 Sema5A(5μg/ml)1ml,处理 RAW264.7 细胞 48 小时,加入 100ng/ml的RANKL 1ml,处理后5分钟、10分钟、15分钟,行蛋白质免疫印迹分析(western blot),检验MAPK信号通路中ERK、JNK、P38磷酸化水平;5.以5μg/mlSema5A1ml处理RAW264.7细胞7天,培养基中预先加入薄骨片,采用Image Pro Plus 6软件分析骨吸收面积;6.采用Mann-Whitney U检验,Spearman相关分析法进行统计学分析。结果:1.与健康对照组相比,RA血清中Sema5A浓度显著升高(5.24±0.59ng/ml vs.2.93±0.34ng/ml,P<0.01)。Sema 5A浓度与RA患者DSA28-CRP评分、CRP水平、CDAI及骨侵蚀相关Sharp评分呈正相关(r值分别为0.273,0.519,0.448,0.292,P<0.05);在抗CCP抗体阳性患者中,Sema5A浓度显著高于抗CCP抗体阴性的RA患者(5.51±0.73ng/ml vs.2.73±0.68 ng/ml,P<0.05);在RA高疾病活动组中,Sema 5A浓度显著高于RA中低疾病活动组(3.7(0.3-24.6)ng/mlvs.0.9(0.4-4.9)ng/ml,P<0.05),且RA高疾病活动组健康评估问卷(Health assessment questionnaire,HAQ)评分显著高于RA中低疾病活动组(4.5 ± 1.5分vs.3 ± 1.2分,P<0.05)。2.在无RANKL作用的情况下,随着Sema 5A浓度增加,TRAP阳性细胞数逐渐增多,5μg/ml作用最强。3.Sema 5A能上调TRAP,CTSK和MMP-9 mRNA的表达水平;4.Western blot分析显示,Sema 5A诱导MAPK途径中ERK的磷酸化;在Sema 5A为5ug/ml,经RANKL 100ng/ml处理5分钟和15分钟后,ERK可被显著激活为磷酸化 ERK(phosphorylation ERK,p-ERK)。5.骨吸收实验显示与对照组相比,5μg/mlSema 5A处理组骨陷窝数增多。结论:1.Sema5A在RA患者中表达升高,且抗CCP抗体阳性者高于抗CCP抗体阴性者;2.Sema 5A浓度与RA疾病活动度及骨破坏程度相关,Sema 5A可作为评估RA活动的生物学指标;3.Sema 5A可以在无RANKL参与的情况下可直接促进小鼠RAW264.7细胞向破骨细胞分化;4.Sema 5A通过MAPK途径在RAW264.7细胞中促进破骨细胞生成。