胃肠道D细胞可分泌生长抑素（somatostatin，SST），SST是一种循环的小肽，它有两种生物活性形式：14个氨基酸构成的SST-14和28个氨基酸构成的SST-28。SST由较大的前体分子前原SST和原SST水解形成。SST抑制胃肠道一系列的生理功能如胃肠运动、胃酸产生、胰酶分泌和胆汁分泌。SST还抑制胰和肠道激素如胰岛素、胰高血糖素、分泌素和血管活性肠肽的分泌。除对神经递质和激素的分泌具有重要调节功能，SST还可调控正常组织和肿瘤的细胞增殖。　　 SST通过与生长抑素受体（somatostatin receptor，SSTR）结合发挥其生理功能。SSTR属于G蛋白耦联受体（G protein-coupled recepfor，GPCR），共有5种亚型，分别称为SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR4和SSTR5。编码5种SSTR亚型的基因分别位于不同的染色体。SSTR2 mRNA通过选择性剪接可产生两种不同的SSTR2：SSTR2A和SSTR2B。SSTR与胃癌发生的关系缺乏系统的研究，仅见单个SSTR亚型与胃癌的研究报道。　　 蛋白激酶B（protein kinase B，PKB）为丝氨酸/苏氨酸激酶，属于cAMP依赖蛋白激酶A/蛋白激酶G/蛋白激酶C（AGC）超家族。PKB在对生长因子效应的信号传导途径中起关键性的作用，调控细胞营养代谢、细胞生长、转录调控和细胞生存等功能。封闭PKB信号传导途径可诱导肿瘤细胞的细胞凋亡和生长抑制。SST类似物可抑制PKB的活性，并且可显著抑制胃癌细胞的生长，诱导细胞凋亡。　　 介导SST抗增殖效应的转录因子和靶基因的研究很少。调节凋亡和细胞周期阻滞的锌指蛋白（zinc finger protein which regulates apoptosis and cell cycle arrest，ZAC）为一种具有锌指结构的转录因子，具有DNA结合和转录活化活性，可抑制肿瘤细胞生长，诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。SST类似物奥曲肽（octreotide，OCT）通过抑制PKB磷酸化，诱导ZAC的表达，介导其对垂体瘤细胞系的抗增殖效应。　　 胃癌组织中SST、SSTR和ZAC的表达有何改变，与胃癌临床病理学特征有何相关性，SST是否通过PKB途径影响ZAC的表达，调节胃癌细胞的生长，目前尚报道甚少。　　 研究目的：　　 1.应用RT-PCR技术显示胃癌细胞系SSTR亚型的表达谱，应用双重染色免疫细胞化学技术观察胃癌细胞系SST、PKB、磷酸化PKB（phosphorylated PKB，p-PKB）和ZAC的共表达，分析胃癌细胞中SST、PKB和ZAC表达的相关性。　　 2.应用免疫组织化学技术比较观察胃癌组织、癌旁组织和相应的正常胃粘膜组织中SST和ZAC的表达，分析胃癌组织中SST与ZAC表达的相关性及其与胃癌临床病理学特征的相关性。应用RT-PCR技术比较显示胃癌组织、癌旁组织和相应的正常胃黏膜组织中SSTR亚型的表达谱，分析SSTR表达与胃癌临床病理学特征的相关性。　　 3.以SST类似物OCT孵育胃癌细胞系，应用Western blot技术观察PKB、p-PKB和ZAC表达水平的变化，应用MTT和流式细胞技术观察SST类似物OCT孵育对胃癌细胞增殖和凋亡的效应。　　 本研究分为以下三部分：　　 第一部分胃癌细胞生长抑素及其受体与蛋白激酶B及ZAC的表达材料与方法　　 1.材料胃癌细胞系BGC-823和SGC7-901培养于含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液中。制备细胞爬片用于免疫组织化学，检测SST、PKB、p-PKB和ZAC的表达；提取细胞RNA用于RT-PCR，检测SSTR亚型mRNA的表达。　　 2.免疫组织化学采用双重染色免疫组织化学方法，按试剂盒说明书操作。以PBS替代一抗为阴性对照。　　 3.RT-PCR SSTR1：上游，AGCCGGTTGACTATTACGCC，下游，GCTCTCACTTCTACC ATTGTC；SSTR2：上游，GGTGAAGTCCTCTGGAATCC，下游，CCATTGCCAGTAGACAGAGC；SSTR3：上游，TCATCTGCCTCTGCrACCTG，下游，GAGCCCAAAGAAGGCAGGCT；SSTR4：上游，CGGCAGTCTTCGT GGTCTAC，下游，GCATCAAGGCTGGTCACGAC；SSTR5：上游，AACACGCTGGTCATCTACGTGGT，下游，AGACACTGGTGAACTGGTTGAC；β-actin：上游，TCCTGTGGCATCCACGAAACT，下游：GAAGCATTTGCGGACGAT。50℃，30 min；94℃，2 min；94℃，30s；60℃，30s；72℃，30s；10个循环。94℃，30s；55℃，30s；72℃，40s；25个循环。72℃，2 min。1.5％琼脂糖凝胶电泳观察结果。　　 4.统计学处理应用SPSS10.0统计软件对数据进行统计学处理，以P<0.05为检验水准。　　 第二部分胃癌组织ZAC与生长抑素及其受体的表达材料与方法　　 1.材料30例胃癌组织及其相应的癌旁组织和正常胃粘膜组织标本。每个标本分为2部分，液氮冻存用于RT-PCR，石蜡包埋用于免疫组织化学。　　 2.免疫组织化学采用SABC免疫组织化学方法，按试剂盒（BOSTER公司）说明书操作。ZAC免疫反应信号采用链霉亲和素-过氧化物酶——DAB显示；SST免疫反应信号采用链霉亲和素-过氧化物酶-AEC显示。以PBS替代一抗为阴性对照。苏木素复染胞核。　　 3.RT-PCR操作同第一部分。　　 第三部分生长抑素类似物对胃癌细胞蛋白激酶B及ZAC的效应材料与方法　　 1.分别以1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L和1000nmol/L的OCT处理胃癌细胞，以MTT法检测OCT对胃癌细胞生长的抑制效率，筛选有效浓度。　　 2.以筛选的有效浓度的OCT处理胃癌细胞24h，提取细胞总蛋白，用于Western blot检测PKB和p-PKB的表达；提取细胞核蛋白，用于Western blot检测ZAC的表达。　　 3.Western blot采用化学发光法显色。以β-actin为内参。　　 4.以流式细胞技术检测OCT处理后，胃癌细胞生长和凋亡的改变。　　 结论:　　 1.胃癌组织中5种SSTR亚型mRNA均有表达，SSTR3mRNA的阳性率明显低于正常胃粘膜组织，且与胃癌的分化程度有关。胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901SSTR3 mRNA表达缺失。　　 2.胃癌组织中，ZAC与SST的表达均明显低于正常胃粘膜组织；ZAC与SST的表达呈明显正相关，ZAC与SST的共表达与胃癌的分化程度、浸润深度和临床分期有关。胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901中SST与p-PKB及ZAC的表达具有相关性。　　 3.OCT孵育可抑制胃癌细胞BGC-823和SGC-7901 PKB的磷酸化，诱导ZAC的表达，抑制胃癌细胞生长，诱导细胞凋亡。　　 4.胃癌中SST可能通过PKB信号传导途径，调节ZAC的表达，抑制胃癌的发生和发展。