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第一部分VRACs阻断剂对小胶质细胞增殖的调控及机制研究目的探讨容积调控性离子通道(volume-regulated anion channels, VRACs)阻断剂他莫昔芬(Tamoxifen)和4-(2-butyl-6,7-dichloro-2-cyclopentyl-indan-1-on-5-yl) oxobutyric acid (DCPIB)对小胶质细胞系BV-2细胞增殖的影响及作用机制。方法不同浓度的Tamoxifen和DCPIB作用于BV-2细胞相应的时间点后,用噻唑蓝(MTT)比色法检测药物对细胞增殖的抑制率；用流式细胞术检测药物处理后BV-2细胞周期的分布；用Western blot检测细胞周期相关蛋白CyclinD1的表达情况。结果VRACs阻断剂Tamoxifen和DCPIB可以下调细胞生长曲线,抑制BV-2细胞增殖,与对照组相比有显著性差异(P<0.05),该抑制作用明显呈时间和浓度依赖性。VRACs阻断剂作用细胞48h后,细胞周期阻滞在G0/G1期,G2/M期和S期细胞明显减少,与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。DCPIB和Tamixifen作用BV-2细胞72h后,与对照组相比,CyclinD1蛋白表达明显降低。结论VRACs阻断剂Tamoxifen和DCPIB可以抑制BV-2细胞增殖,其作用机制可能与阻滞细胞周期的进展和下调细胞周期相关蛋白CyclinD1蛋白表达有关。第二部分VRACs阻断剂对小胶质细胞凋亡的调控及机制研究目的探讨VRACs阻断剂Tamoxifen和DCPIB对小胶质细胞株BV-2细胞凋亡的影响及作用机制。方法不同浓度的Tamoxifen和DCPIB作用于BV-2细胞相应的时间点后,用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的存活率；用流式细胞术检测药物处理后BV-2细胞凋亡率的变化；线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测实验浓度Tamoxifen和DCPIB作用于BV-2细胞后线粒体膜电位(△Ψm)的变化；用Western blotting检测细胞在药物干预后凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Fas及Fas-L的表达情况。结果VRACs阻断剂Tamoxifen和DCPIB可降低BV-2细胞的存活率,与对照组相比有显著性差异(P<0.05),呈时间和浓度依赖性。流式细胞术检测显示实验浓度Tamoxifen和DCPIB可以明显诱导BV-2细胞凋亡,呈浓度依赖性。Tamoxifen和DCPIB作用BV-2细胞48h后,与对照组相比,线粒体膜电位随着药物浓度的增加显著下降(P<0.05)。实验浓度DCPIB和Tamixifen作用BV-2细胞72h后,促凋亡相关蛋白Bax、Fas及Fas-L表达增强,而抗凋亡相关蛋白Bcl-2表达降低。结论VRACs阻断剂Tamoxifen和DCPIB可以降低BV-2细胞存活率,诱导细胞凋亡,诱导线粒体膜电位崩溃,改变凋亡相关蛋白的表达,其诱导凋亡的作用机制和线粒体凋亡途径和死亡受体凋亡途径相关。第三部分VRACs阻断剂对OGD诱导小胶质细胞活化的抑制作用及机制研究目的探讨VRACs阻断剂Tamoxifen和DCPIB对氧糖剥夺实验(Oxygen Glucose Deprivation, OGD)诱导小胶质细胞BV-2细胞活化的抑制作用及其作用机制。方法将传代培养的小鼠来源的小胶质细胞系BV-2细胞随机分为Control组、OGD组、DMSO+OGD组、Tamoxifen (0.1uM、luM)+OGD、DCPIB (1uM、10uM)+OGD组,分别在培养1h、6h、12h后,显微镜下观察细胞形态的变化,收集细胞上清液,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)检测细胞毒性,检测细胞上清液中总一氧化氮(Nitric oxide, NO)的含量,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测细胞上清液中IL-1β、TNF-a的含量,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞中iNOS、IL-1β、TNF-α mRNA表达情况。结果细胞培养6h后,与Control组相比,OGD组细胞突起减少,胞体变的更圆,更加有立体感,形状趋向阿米巴样,而在Tamoxifen+OGD组和DCPIB+OGD组,上述细胞形态改变较轻。细胞培养1h、6h、12h后,与Control组相比,OGD组细胞上清液中NO、IL-1β、TNF-α的含量含量明显增加,具有统计学意义(P<0.05),而Tamoxifen+OGD组和DCPIB+OGD组细胞上清液中NO、IL-1β、TNF-a的含量与OGD组比较显著降低,具有统计学差异(P<0.05)。各组间iNOS、IL-β、TNF-α mRNA表达没有明显变化。结论VRACs阻断剂Tamoxifen和DCPIB可以抑制OGD诱导BV-2细胞活化,减少BV-2细胞对NO、IL-1β、TNF-α的释放。其机制与iNOS、IL-1β、TNF-α mRNA表达无关,可能和氯离子通道的阻断有关。