促肝细胞生长素对化学性肝损伤小鼠肝脏和H2O2损伤LO2细胞的保护作用及其初探

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目的初步研究促肝细胞生长素(PHGF)对化学性肝损伤小鼠肝脏以及过氧化氢损伤的L02肝细胞的保护作用及其机制,为明确促肝细胞生长素的临床使用提供一定的理论依据。方法本课题分为体内体外两部分:(1)体内法。首先对PHGF的分子量进行电泳分析,接着按照《国家药品标准》第九册(WS-10001 (HD-0828)-2002)中促肝细胞生长素活性测定法检测其生物学活性;然后采用灌胃四氯化碳制造小鼠化学性肝损伤模型。试验分为六组。空白对照组,模型组,三个PHGF剂量组(12.5、25、50 mg·kg-1)和一个阳性对照组(永宁肝保胶囊)。小鼠给药一周,依法进行造模后,取血清测定各组小鼠ALT和AST的值;取肝脏进行病理组织学检查并用免疫组化检测Bcl-2和Bax蛋白的表达;运用Western blot法检测各组小鼠肝组织Bcl-2和Bax蛋白的表达。(2)体外法。首先采用MTT法检测PHGF对正常L02细胞的影响,以考察其细胞毒性。并采用过氧化氢(H202)制造L02细胞体外凋亡模型,研究PHGF对H202损伤的L02细胞的保护作用和机制。试验分为5组。空白对照组,H202组和三个PHGF浓度组(50、100、200μg·mL-1)。采用MTT法检测PHGF对不同组别L02细胞存活率的影响;应用流式细胞术检测不同组别L02细胞凋亡变化,运用Western blot法检测各组L02细胞内目标蛋白的表达情况。结果体内试验表明:PHGF各给药组ALT与AST的值要明显低于模型组(P<0.05);病理切片观察,各给药组的肝组织细胞坏死情况明显好于模型组;免疫组化实验表明,PHGF各给药组Bcl-2蛋白的表达明显高于模型组(P<0.05),而Bax蛋白的表达明显低于模型组(P<0.05);Westernblot实验表明:PHGF各剂量组,按剂量从高到低,Bcl-2蛋白的表达明显高于模型组(P<0.01),而Bax蛋白的表达明显低于模型组(P<0.01)。体外试验表明:PHGF对正常L02细胞在一定的浓度范围内(50·02.5μg·mL-1)无明显增殖作用也无明显细胞毒作用,通过实验表明,H202对L02细胞造模的最佳浓度为0.25mmoL·L-1;PHGF对H2O2诱导的L02细胞损伤MTT试验结果表明,各浓度组光密度值显著高于H202组(P<0.05);流式细胞术结果表明:PHGF各浓度组L02细胞凋亡率显著低于H202组(P<0.01);Western blot实验表明:PHGF各浓度组,按浓度从高到低,Bcl-2蛋白的表达明显高于H202组(P<0.01),而Bax蛋白的表达明显低于H202组(P<0.01)。结论促肝细胞生长素对四氯化碳引起的小鼠化学性肝损伤以及过氧化氢造成的L02细胞凋亡具有一定的保护作用,其作用机制可能与其增加Bcl-2蛋白的表达以及减少Bax蛋白的表达有关。
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