论文部分内容阅读
h-1的细胞存活率达到了最大值84.1％，比生长速率低于或高于0.02h-1，细胞存活率均降低。细胞存活率与发酵液中水蛭素的浓度具正相关性。细胞存活率高，总水蛭素与Hir65的浓度高，细胞存活率降低，总水蛭素与Hir65的浓度也降低。同时，利用物料恒算方程，计算出流加培养过程恒定比生长速率下甲醇的流加速率公式，进行了比生长速率分别为0.0141h-1和0.0184h-1的甲醇限制性流加培养。比生长速率为0.0184h-1时Hir65的浓度达到1.98g/L，而比生长速率0.0141h-1时Hir65的浓度仅有1.19g/L，前者的浓度比后者高66％。比生长速率为0.0184h-1时的水蛭素降解程度明显低于比生长速率0.0141h-1时的降解程度。利用流式细胞术检测细胞存活率，发酵62h时，比生长速率0.0184h-1的培养的细胞存活率为76.6％，比生长速率为0.0141h-1的培养的细胞存活率为69.3％，前者的细胞存活率比后者高10.5％。
为了缓解氧化压力，在甲醇流加的起始阶段添加维生素C于发酵液中。在发酵液中添加10mmol/L维生素C，发酵末期的细胞存活率从74％提高到83％，水蛭素的降解减少，完整水蛭素与总水蛭素的浓度之比α约为46％。在发酵过程不断补加维生素C以维持其浓度在4mmol/L至10mmol/L之间，发酵末期的细胞存活率可以达到91％。与未加维生素C的对照相比，在甲醇流加阶段添加维生素C能够明显地减轻胞内ROS对细胞膜的损害，从而使细胞存活率由74％增加到91％。维生素C的添加明显减少了胞外水蛭素的降解，完整的水蛭素分子Hir65和总水蛭素含量分别达到了2.90g/L和5.03g/L，α值提高到58％。