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目的PTEN是一种抑癌基因，是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因，对细胞增殖起负性调控作用。Ki67是一种与细胞增殖密切相关的核抗原，是应用最广泛的增殖细胞标记之一。二者的表达异常与肿瘤的生物学行为密切相关。本课题目的为明确PTEN和Ki67与胶质瘤恶性程度的关系，以及二者之间的相关情况，从而进一步探讨PTEN的作用机制，并提出其对临床工作的指导意义。方法一、标本来源收集从2003年12月1日到2005年11月30日中国医科大学盛京医院神经外科手术切除之胶质瘤标本40例，同时收集该科室同期因重度颅脑外伤行内减压而切除的脑组织作为正常脑组织，共计10例。所有肿瘤标本均按照WHO于2000年制定的神经系统肿瘤分类标准重新确定病理诊断及分级。二、免疫组化染色方法全部标本经甲醛固定和石蜡包埋后，进行免疫组织化学染色，检测PTEN、Ki67的表达。具体步骤如下：首先将石蜡标本制成5微米厚切片，常规二甲苯脱蜡、酒精脱水后，切片浸入3％H2O2溶液中，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。切片浸入0.01M枸橼酸溶液（PH=6.0）中，用500W微波炉加热进行抗原修复10分钟。切片滴加正常二抗动物血清封闭，室温下孵育10分钟，消除非特异性反应。切片滴加PTEN和Ki67单克隆抗体，在室温下静置1小时，然后滴加生物素标记的二抗，室温下孵育1小时。应用超敏SP试剂盒，按照S-P法常规显色。最后用苏木素复染切片。三、结果判定PTEN蛋白多表达于胞浆，阳性结果以细胞浆出现明显棕黄色颗粒为准；Ki-67表达位于细胞核，阳性结果以细胞核出现明显棕黄色颗粒为准。每张切片随机计数10个高倍镜视野，计算瘤细胞染色阳性百分率，取均值作为PTEN和Ki-67的阳性百分率。四、统计学分析方法统计分析采用统计学软件包SPSS11.5进行统计学分析。各组之间率的比较采用x2检验，当例数少于40时，采用Fisher精确概率法检验，采用spearman相关系数r分析PTEN与Ki-67表达之间的关系。以P＜0.05为差异有统计学意义。结果PTEN在全部50例标本中均有不同程度的表达。在非肿瘤脑组织和胶质瘤之间、高分化组（Ⅰ—Ⅱ）与低分化组（Ⅲ—Ⅳ）之间，PTEN的表达程度均有显著性差异（P＜0.05）。Ki67在正常脑组织中无表达，在Ⅰ—Ⅱ级胶质瘤中阳性率显著低于Ⅲ—Ⅳ级胶质瘤中的阳性率。结果显示，PTEN的表达强度随病理级别增高呈下降趋势，而Ki67的表达强度随病理级别增高呈上升趋势，二者之间呈明显的负相关（r=-1.00，P＜0.05）。讨论根据世界卫生组织1992年的统计，随地区和种族不同，原发性脑肿瘤（包括良性和恶性）的年发病率为2-19／10万人，在所有的原发性脑肿瘤中约40％-50％为胶质细胞瘤。由于胶质瘤多呈浸润性生长，所以治疗十分困难。如何提高恶性脑肿瘤特别是胶质瘤的治疗效果，是摆在我们面前的艰巨任务。近年来分子生物学的研究认为胶质瘤的发生及恶性进展与基因的异常密切相关，包括原癌基因的激活及过表达；抑癌基因的缺失、突变失活；细胞增殖和凋亡失衡等多基因参与、多步骤演变的过程，并由此认为肿瘤是基因的疾病。肿瘤的特征性表现形式为不受控制的细胞增殖，并缺乏起源组织的生化特征，现代的转化论认为这一过程是多基因变异累积的结果，每一种变异都有助于肿瘤的恶性转化。抑癌基因在正常情况下可抑制细胞的过度生长，抑制细胞向恶性表型转化。若缺乏有功能的抑癌基因编码蛋白，常会使细胞失去正常的生长抑制调控机制，转为恶性增殖状态。PTEN是1997年发现的定位于第10号染色体的抑癌基因，PTEN是一个与张力蛋白和辅助蛋白高度同源的磷酸酶。该基因是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因，在多种人类恶性肿瘤中均有不同程度的变异失活。研究表明，在胶质母细胞瘤中，最常见的基因改变是10号染色体。PTEN的突变缺失与多形性胶质母细胞瘤、高度恶性前列腺癌、卵巢癌等多种恶性肿瘤的发生密切相关。大量的研究结果表明PTEN具有双重特异性磷酸酶活性，它的抑癌作用主要是依靠其脂质磷酸酶活性来完成的。PTEN通过使PIP3去磷酸化影响PI3K-AKT2通路，阻止细胞生长及促进细胞凋亡；通过影响整合素介导的信号传导通路对FAK去磷酸化，从而抑制细胞转移和浸润等，抑癌基因PTEN的缺失突变已经被证实是胶质瘤恶性进展中重要的分子事件之一。肿瘤增殖活性的检测对于判断肿瘤的恶性程度，预见其生物学行为，评估预后及选择适当的治疗措施是很重要的。Ki67是一种与细胞增殖密切相关的核抗原，存在于细胞周期的G1后期、S、G2、M期，是应用最广泛的增殖细胞标记之一。近年来，PTEN与Ki67已经被各个领域的专家学者进行了多方面的检测及深入广泛的研究，并取得了大量成果。但是，将二者结合起来，研究其在胶质瘤中的表达来得出相应结论，目前尚不多见。本课题利用免疫组化方法，通过联合检测PTEN与Ki67在不同级别胶质瘤中的表达水平，研究它们与胶质瘤恶性程度之间的关系，以及二者之间的相关情况，以期进一步探讨PTEN的作用机制，并为明确肿瘤的发病机制和指导临床治疗提供强有力的理论和实验依据。结论本实验结果显示：PTEN的表达强度随病理级别增高呈下降趋势，而Ki67的表达强度随病理级别增高呈上升趋势，二者之间呈明显的负相关（r=-0.01，P＜0.05），提示PTEN与细胞的增殖密切相关，它可通过下调细胞增殖信号通路抑制细胞的增殖，而达到抑制肿瘤的作用，这对于胶质瘤基因治疗中靶基因的选择具有非常重要的临床意义。