氧化苦参碱对哮端大鼠肺组织IL-10、CTLA-4及IL-17表达的影响

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目的:观察剂量不同的氧化苦参碱(Oxymatrine, Oxy)药物对哮喘大鼠的作用,探讨氧化苦参碱治疗哮喘的作用机制。
  方法:40只清洁级、雌性、健康的SD大鼠按随机数字表法分成5组,每组8只。A组(哮喘组):第1、8天用新鲜配制的卵蛋白(Ovalbumin,OVA)/Al(OH)3悬浊液行腹腔注射致敏,15d-21d5%的OVA雾化液雾化激发,每天60min。B组(低剂量组):致敏、激化方式同A组,15d-21d雾化前30分钟,Oxy50mg/kg腹腔注射。C组(中剂量组):致敏、激化方式同A组,15d-21d雾化前30分钟,Oxy100mg/kg腹腔注射。D组(高剂量组):致敏、激化方式同A组,15d-21d雾化前30分钟,Oxy150mg/kg腹腔注射。E组(对照组):第1d、8d腹腔注射1ml0.9%生理盐水。15d-21d0.9%生理盐水进行雾化,每天60min,15d-21d雾化前30分钟0.9%生理盐水0.5ml/鼠/次腹腔注射。实验过程中,观察大鼠活动、饮食、呼吸等生活情况,末次激发24h后处死全部大鼠,取大鼠肺脏,HE染色观察肺组织病理改变,采用免疫组化、RT-PCR、WesternBlot测定各组肺组织中IL-10、IL-17、CTLA-4基因及蛋白水平的表达。
  结果:
  1、各组实验大鼠致敏激发后生活状态
  哮喘组大鼠逐渐出现易激惹、搔抓、呼吸频率增快、喜蜷伏、食欲减退,部分大鼠出现毛发脱落、行动迟缓、皮肤紫绀,重者可闻哮鸣音。予以Oxy干预的各组大鼠也出现哮喘组情况,但症状减轻,中、高剂量Oxy干预组症状减轻更为明显。对照组大鼠活动、进食、呼吸等情况未见异常。
  2、各组实验大鼠肺组织的改变
  肺组织HE染色结果显示,正常对照组大鼠肺组织气管直径正常,未见炎症细胞浸润;哮喘组大鼠肺组织气管直径减小,管壁增厚,周围大量炎症细胞浸润,气道上皮倒伏,管腔分泌物增多。经Oxy干预后,气道狭窄及炎症细胞侵入情况较哮喘组改善,且病变改善程度与氧化苦参碱用药剂量呈正比。
  3、各组实验大鼠肺组织IL-10、CTLA-4、IL-17的表达
  免疫组化检测肺组织IL-10、CTLA-4的表达:哮喘组IL-10与CTLA-4表达最低,对照组IL-10与CTLA-4表达最高,两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。Oxy干预组随药物剂量增加IL-10与CTLA-4的表达逐渐增加,其中高剂量组与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。
  免疫组化检测肺组织IL-17的表达:哮喘组IL-17表达最高,对照组IL-17表达最低,两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。Oxy干预组随药物剂量增加IL-17表达逐渐减弱,其中高剂量组与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。
  4、各组实验大鼠肺组织IL-10、CTLA-4、IL-17mRNA的表达肺组织IL-10、CTLA-4mRNA的表达:哮喘组IL-10与CTLA-4mRNA表达最低,对照组IL-10与CTLA-4mRNA表达最高,两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。Oxy干预组随药物剂量增加表达逐渐增加,其中高剂量组与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。
  肺组织IL-17mRNA的表达:哮喘组IL-17mRNA表达最高,对照组IL-17mRNA表达最低,两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。Oxy干预组随药物剂量增加表达逐渐减弱,其中高剂量组与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。
  5、各组实验大鼠肺组织IL-10、CTLA-4、IL-17蛋白水平的表达
  肺组织IL-10、CTLA-4蛋白的表达:哮喘组IL-10与CTLA-4蛋白表达最低,对照组IL-10与CTLA-4蛋白表达最高,两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。Oxy干预组随药物剂量增加表达逐渐增强,其中高剂量组与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。
  肺组织IL-17蛋白的表达:各组中哮喘组IL-17蛋白表达最高,对照组IL-17蛋白表达最低,两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。予以Oxy干预组随药物剂量增加表达逐渐减弱,其中高剂量组与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。
  结论:
  1.氧化苦参碱有改善哮喘大鼠症状、抑制其肺组织炎症反应的作用。
  2.氧化苦参碱对哮喘大鼠抑制作用的机制可能与促进肺组织IL-10、CTLA-4的表达及抑制肺组织IL-17的表达有关。
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